Meio Condicionado por Órgãos: Meio Gerador de Células de Órgãos Colhidas para Estudos de Câncer Metastático

Certos órgãos produzem fatores solúveis e tornam-se locais preferenciais para metástases de câncer de mama. Um meio condicionado preparado a partir dessas células de órgãos colhidos pode ajudar a identificar e estudar esses fatores.

Comece colocando um órgão colhido, como um fígado, em um tubo contendo PBS frio e virando o tubo para cima e para baixo para remover o sangue residual do órgão. Coloque o órgão em uma placa de Petri. E usando um bisturi, corte o órgão em pequenos pedaços.

Ressuspenda esses pedaços em um tubo contendo um meio basal suplementado com um antibiótico para apoiar o crescimento celular e evitar a contaminação. Agora, despeje a suspensão celular em uma placa de cultura e incube a 37 graus Celsius com um suprimento contínuo de dióxido de carbono pela duração necessária.

Durante a incubação, essas células liberam metabólitos, fatores de crescimento e proteínas da matriz extracelular no meio. Em seguida, transfira a suspensão celular para um tubo de centrífuga e adicione meio fresco para diluí-la. Centrifugar o tubo e filtrar o sobrenadante, que é o meio condicionado, num novo tubo.

No protocolo a seguir, prepararemos meios condicionados dos pulmões e cérebro de c