Inflação de tinta nanquim: um método de coloração para visualizar nódulos tumorais

Comece colocando um camundongo sacrificado com o lado ventral para cima em uma cama cirúrgica e prendendo os membros do animal. Usando uma tesoura, corte ao longo da linha média através da caixa torácica até as glândulas salivares. Coloque uma ponta de pipeta embaixo da traqueia para elevá-la e isolá-la. Gire a cama cirúrgica 180 graus. Insira uma agulha de seringa contendo uma mancha de tinta nanquim na traqueia e injete a tinta nos pulmões até sentir resistência.

As células cancerígenas secretam uma grande quantidade de ácido lático que gera uma forte carga negativa na superfície celular. Quando essas células são coradas com tinta nanquim, uma mancha ácida, a superfície celular repele a mancha e permanece sem coloração.

Use uma tesoura para cortar a traqueia e deslize uma pinça sob os pulmões. Puxe suavemente os pulmões para fora do corpo do animal. Enxágue os pulmões em água e transfira-os para um frasco contendo a solução de Fekete para remover o excesso de manchas e fixar o tecido em uma capela de exaustão. Os nódulos tumorais aparecem brancos contra o fundo escuro.

No protocolo a seguir, realizaremos a técnica de insuflação com tinta nanquim para validar metástases pulmonares