Ensaio de formação de colônias de ágar mole: um método para testar os efeitos de novos compostos na proliferação de células cancerígenas

Para começar, pegue uma concentração apropriada de agarose derretida em um tubo cônico e adicione uma quantidade desejada de meio de cultura quente a ele. Inverta suavemente para misturar o conteúdo. Adicione esta mistura em cada poço de uma placa de seis poços e deixe solidificar. Esta é a camada inferior. Em seguida, trate as células cancerígenas com o composto de interesse e adicione a concentração necessária de agarose.

Agora, despeje esta mistura contendo o número desejado de células por mililitro em cada poço. Esta é uma camada contendo células. Assim que o meio solidificar, incube a placa a 37 graus Celsius por uma semana. Prepare uma camada alimentadora misturando agarose ao meio e complemente essa mistura com o composto de interesse. Adicione suavemente esta camada de alimentação em cada poço, deixe-a solidificar e incube a placa a 37 graus Celsius.

Repita este procedimento de alimentação semanalmente para reabastecer as células com o meio até que as colônias se formem. Se o composto de interesse for um inibidor da tumorigenicidade, ele suprimirá o crescimento das células, resultando em poucas colônias nos poços. No protocolo a seguir, realizaremos um ensaio de formação de