Ensaio de imunofluorescência CTC: uma técnica para caracterizar células tumorais circulantes

- Para começar, dilua as células tumorais circulantes isoladas ou CTCs até a concentração necessária usando uma solução anti-ligação que proteja as células do cisalhamento do fluido e danos causados pela pressão. Em seguida, monte uma lâmina de microscópio revestida de polilisina e um cartão de filtro de citocentrífuga em um conjunto de funil de citocentrífuga. Transferir a suspensão celular para a porta do funil do conjunto, seguida de citocentrifugação.

A força centrífuga concentra e deposita uma monocamada de células em uma área circular na lâmina. Isole a área depositada com células usando um isolador de silicone. Depois de seco, fixe as células usando paraformaldeído. Em seguida, incube as células com uma solução de bloqueio adequada contendo proteínas que se ligam prontamente a quaisquer locais de ligação não específicos na superfície celular.

Agora, rotule as células com uma solução de anticorpo marcada com fluorescência de interesse. Os anticorpos marcados com fluoróforo reconhecem e se ligam a moléculas-alvo específicas na superfície da célula. Lave a amostra para remover quaisquer anticorpos não ligados. Adicione uma solução de montagem para preparar a amostra para imagem