Insuflação de agarose de pulmão inteiro: um método de preparação de pulmões para imagens ao vivo ex vivo

- Primeiro, coloque um rato sacrificado em uma placa de dissecação. Logo acima do abdômen, corte a pele e o peritônio. Perfure o diafragma e corte ao longo das costelas e da caixa torácica até a traqueia. Faça uma pequena incisão na traqueia. Insira suavemente uma agulha dentro da traqueia sem ferir a carina e prenda-a com uma pinça. Injete agarose de baixo ponto de fusão à temperatura corporal normal dentro dos pulmões. Remova lentamente a seringa e mantenha a agulha dentro para evitar o refluxo da agarose.

Despeje PBS frio nos pulmões para promover a gelificação de agarose. Remova a agulha e prenda a traqueia com uma pinça para evitar o refluxo de agarose não solidificada. Abra o esterno, segure a traqueia com uma pinça e corte-a com uma tesoura. Retire os pulmões da cavidade torácica. Separe os lóbulos na mídia. Coloque dentro de poços de imagem sob condições fisiológicas para microscopia. A agarose preserva a morfologia pulmonar em temperaturas fisiológicas que ajudam a observar as interações celulares vivas. No protocolo a seguir, demonstraremos imagens ao vivo ex vivo de pulmões para estudar as interações entre células cancerígenas e células estromais.

- Para preparar os pulm