Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 5:38 min. • April 30th, 2023
- Para começar, semeie as células de câncer de pulmão em um frasco em T contendo meio de cultura de tecidos e deixe-o crescer durante a noite. Em seguida, suspenda o miRNA com um agente transfectivo em um meio transfectador. Remova o meio e adicione um meio de transfecção que introduzirá o miRNA nas células cancerígenas. O miRNA é uma molécula de RNA não codificante que se liga a uma sequência complementar de mRNA e bloqueia a expressão gênica. Incubar o balão durante o período desejado.
Em seguida, substitua o meio por meio de cultura de tecidos e cresça durante a noite. Adicione tripsina para dissociação celular. Transfira a mistura para um tubo de centrífuga contendo PBS e centrifugue-o. Remova o sobrenadante e adicione tampão de lise para lisar as células e adicione etanol ultrapuro para precipitação. Colocar a mistura numa coluna de separação para purificar o ácido nucleico e centrifugar.
Remova o fluxo e adicione um tampão de lavagem para remover a membrana celular lisada e centrifugar. Remova o tampão de lavagem e adicione DNase com tampão de digestão DNase para remover o DNA da amostra e centrifugar. Adicione tampão de preparação de RNA para isolar o RNA e centrifugar. Cole
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