Análise do ciclo celular: uma abordagem para estudar a regulação do ciclo celular de células de câncer de pulmão transfectadas com miRNA

- Um microRNA ou miRNA é um RNA pequeno e não codificante. Após a transfecção ou introdução de mRNA em uma célula, ele forma um complexo de proteínas de miRNA. O complexo tem como alvo e se liga a mRNA específico e regula negativamente sua expressão, interrompendo a progressão do ciclo celular.

Para iniciar a análise, adicione um fixador desidratante adequado a uma cultura colhida de células de câncer de pulmão transfectadas com miRNA. O fixador preserva as células e também permeia a membrana celular. Trate as células com uma mistura de iodeto de propídio, um corante de ácido nucleico fluorescente e enzima ribonuclease.

O corante entra nas células e cora o DNA e o RNA. As enzimas degradam especificamente o RNA, permitindo a quantificação ideal do DNA. Use um citômetro de fluxo para determinar a proporção de células interrompidas em diferentes fases do ciclo celular com base na intensidade de fluorescência de células individuais.

As células nas fases de repouso e crescimento têm menor conteúdo de DNA e, portanto, menor intensidade de fluorescência. As células na fase Gap 2 com o dobro da quantidade de DNA produzem o dobro da intensidade de fluorescência. As células na fase de síntes