Microarray de anticorpos: uma técnica para estudar a expressão proteica de células de câncer de pulmão tratadas com miRNA

- Comece adicionando uma solução de biotina e um tampão de rotulagem à amostra de proteína. Incubar para facilitar a ligação da biotina às proteínas. Adicione um reagente de parada e vórtice. Em seguida, coloque uma lâmina de microarray de anticorpos em um prato contendo um reagente de bloqueio para evitar a ligação não específica de anticorpos. Lave a lâmina com água bidestilada para remover a solução de bloqueio. Coloque a lâmina de microarray em uma câmara. Misturar a amostra de proteína biotinilada com uma solução de acoplamento e adicionar na lâmina para facilitar a ligação das proteínas-alvo aos seus anticorpos correspondentes. Transfira a lâmina para um prato contendo um tampão de lavagem e substitua o tampão por água bidestilada duplamente. Em seguida, coloque a lâmina em um tampão de detecção contendo estreptavidina marcada com fluorescência para promover sua ligação às proteínas biotiniladas.

Incube o prato no escuro para manter a intensidade da fluorescência. Remova a lâmina e coloque-a em um scanner de microarray. O scanner procura sinais fluorescentes da estreptavidina ligada à proteína alvo. Com base na intensidade da fluorescência, o software analisa a extensão da ex