JoVE Encyclopedia of Experiments
Pesquisa sobre o Câncer
0 vistas • 5:27 min • April 30th, 2023
- As células tumorais mostram alta atividade glicólica. Traçadores de rádio, como a fluordesoxiglicose F18 - FDG - são análogos da glicose usados para observar tecidos cancerígenos. Primeiro, meça o decaimento da radioatividade da solução de FDG em um calibrador de dose. Aspire a solução de FDG em uma seringa de insulina e coloque em um suporte de seringa de chumbo. Coloque um rato em uma temperatura quente, para evitar a ativação do tecido adiposo marrom. O tecido adiposo marrom ativado leva a uma maior absorção de FDG. Anestesie o mouse por dois minutos e transfira-o para um limitador. Pique a cauda e meça o nível de glicose no sangue. A hiperglicemia pode levar à redução da captação de FDG pelos pulmões.
Em condições quentes, higienize e dilate a veia da cauda do camundongo. Injetar solução de FDG. Transfira o camundongo para dentro da câmara anestésica para distribuição sistêmica de FDG. Dentro da célula cancerígena, a hexoquinase converte FDG em fosfato FDG 6, que não pode metabolizar mais, acumulando-se dentro da célula. Prenda o mouse em decúbito dorsal sob anestesia em uma câmara de imagem. Realize imagens PET/CT. Após a imagem, deixe o camundongo se recuperar na gaiola. A emissão de pósitrons de F18 é registrada durante a tomografia computadorizada, enquanto a tomografia computadorizada mostra imagens de raios-X dos tecidos. O protocolo a seguir mostra imagens FDG PET/CT de modelos de câncer de pulmão metabolicamente ativos.
--cuidado. Use equipamento de proteção e siga todos os procedimentos regulamentares aplicáveis ao manusear a radioatividade. Comece aquecendo a gaiola de camundongos a serem fotografados a 37 graus Celsius, durante a hora anterior à injeção de fluorodesoxiglicose marcada com flúor18. Isso reduz o consumo de gordura marrom do traçador. Pese o primeiro mouse e registre seu peso. Depois de anestesiar o camundongo usando um método aprovado institucionalmente, teste a profundidade da anestesia beliscando o dedo do pé. Se nenhuma resposta for observada, continue o procedimento aplicando pomada oftálmica nos olhos para evitar qualquer ressecamento durante a anestesia. Com cuidado, dilua a fluorodesoxiglicose marcada com flúor18, que tem uma meia-vida radioativa de 109 minutos, em solução salina estéril a uma concentração de injeção corrigida por decaimento ajustada de 70 a 75 microcurie por 100 microlitros.
Em seguida, aspire 100 microlitros em uma seringa de insulina com uma agulha de calibre 28 e meça a dose de radioatividade, usando um calibrador de dose. Registre a medição e o tempo de medição para determinar a correção de decaimento. Coloque a seringa em um suporte de seringa de chumbo. Para injetar, primeiro aqueça a cauda por 1 a 2 minutos com uma gaze embebida em água morna. Em seguida, limpe com isopropanol a 70% para dilatar a veia da cauda, pouco antes da injeção. Administre todo o volume na seringa com uma injeção em bolus através da veia da cauda lateral e registre o momento da injeção. Em seguida, meça a dose restante na seringa usando o calibrador de dose e registre a medição e o tempo.
Finalmente, coloque o camundongo injetado na câmara de anestesia com 1,5 a 2% de isoflurano a 37 graus Celsius para permitir que a sonda seja distribuída pela circulação sistêmica do camundongo por uma hora antes da tomografia por emissão de pósitrons. Após uma hora, coloque o primeiro camundongo em uma câmara de imagem ajustada a 37 graus Celsius, sob anestesia com isoflurano do cone do nariz e prenda seus membros no lugar com fita adesiva na posição supina. Coloque a câmara de imagem no scanner PET/CT e adquira as varreduras PET e CT conforme descrito no manual do scanner PET/CT. Após a conclusão do PET/CT, remova o camundongo da câmara de imagem e deixe-o se recuperar em sua gaiola.