Ensaio de formação de colônias: avaliando a eficácia de agentes anticancerígenos em células de câncer de pulmão formadoras de colônias

- O ensaio de formação de colônias é uma análise in vitro de um medicamento anticancerígeno no crescimento da célula cancerígena, proliferando e diferenciando-se em colônias em meio semissólido. Para começar, semeie células cancerígenas no meio RPMI com suplemento de crescimento - soro fetal bovino, ou FBS, e antibiótico. Incube as células pelo tempo necessário.

Em seguida, colete a concentração desejada de células em um tubo de microcentrífuga e centrifugue. Suspenda novamente o pellet em PBS. Prepare o meio à base de metilcelulose e distribua-o em diferentes tubos com FBS para promover o crescimento ideal.

Adicione uma quantidade apropriada de suspensão celular em tubos e vórtice-os para misturar as células com o meio. Em seguida, adicione compostos anticancerígenos em tubos e prepare um controle adicionando DMSO. Tubos de vórtice.

Adicione esta mistura de células à placa de cultura e incube durante o período desejado. Após a incubação, adicione brometo de metiltiazol difeniltetrazólio, ou MTT, e incube por algum tempo. O MTT reduz o sal de tetrazólio amarelo em células viáveis a cristais de formazan roxo. As colônias viáveis tornam-se violetas. Capture as imagens usando uma câme