Coloração imuno-histoquímica: um método para obter informações espaciais de seções de tecido fino

- Comece colocando uma seção de tecido fino em uma solução de amônia para permitir a recuperação suave do antígeno. Transfira a seção para uma lâmina revestida de polilisina. As células carregadas negativamente se ligam à polilisina carregada positivamente. Em seguida, adicione peróxido de hidrogênio para bloquear a atividade da peroxidase endógena. Lave a lâmina em solução salina com tampão Tris, TBS.

O TBS promove o acesso dos anticorpos aos antígenos, quebrando as ligações cruzadas das proteínas. Lave a seção com uma solução em bloco para reduzir a ligação de anticorpos não específicos. Adicione anticorpos primários à seção e incube durante a noite. O anticorpo primário se liga ao seu antígeno específico presente na superfície celular. Lave a lâmina com TBS.

Adicione anticorpos secundários conjugados com biotina que se ligam à região Fc do anticorpo primário. Lave a seção com a enzima estreptavidina-biotina peroxidase. Em seguida, adicione substrato cromogênico de peroxidase ao tecido. A peroxidase converte o cromogênio em um produto insolúvel colorido.

Contra-core o tecido com solução de hematoxilina. A hematoxilina se liga aos componentes ácidos das células e os torna azuis. O