Isolamento de exossomos: uma técnica para separar exossomos do plasma de pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas

- Os exossomos são pequenas vesículas ligadas à membrana que transportam biomoléculas como lipídios, proteínas, DNA, mRNA e microRNA. Os exossomos são liberados por diferentes tipos de células em espaços extracelulares e podem ser isolados de biofluidos como o plasma.

Para começar, centrifugue a amostra de plasma para remover células e detritos. Transferir o sobrenadante plasmático para um novo tubo. Trate o plasma com a concentração desejada da enzima ribonuclease. Incubar a amostra num bloco de aquecimento a 37 graus Celsius durante um período adequado.

A enzima degrada qualquer RNA livre na amostra, enquanto o RNA exossômico permanece protegido. Diluir a amostra com PBS. Em seguida, adicione a concentração desejada de solução enzimática de proteinase K e incube a 37 graus Celsius por um tempo apropriado. A proteinase K degrada a maior parte das proteínas plasmáticas. Também inativa a enzima ribonuclease adicionada anteriormente, eliminando assim o risco de degradação do RNA exossômico durante o processamento a jusante.

Adicionar um volume adequado de tampão de precipitação de exossomas para facilitar a separação dos exossomas do plasma. Centrifugar a amostra para obter um sedime