Instilação e fixação pulmonar: introdução de líquido na traqueia e fixação dos pulmões para medir o volume pulmonar fixo

- A instilação pulmonar é usada para introduzir substância diretamente na traqueia para analisar pulmões de camundongos com câncer ou outras patologias. Primeiro, coloque um mouse anestesiado em uma plataforma de intubação inclinada e raspe o cabelo do pescoço. Faça uma pequena incisão com uma tesoura abaixo do pescoço e puxe suavemente a pele usando uma pinça para revelar a traqueia. Insira um cateter na traqueia pela boca e observe-o através de uma incisão. Injete um líquido na traqueia e infle rapidamente os pulmões introduzindo ar com uma seringa vazia para distribuir o líquido adequadamente.

Feche a ferida e coloque o rato em uma câmara de recuperação. Após o período desejado, sacrifique o rato e exponha os pulmões. Infle com fixador para quantificar a capacidade pulmonar total. Coloque os pulmões em um tubo com um fixador. Meça o volume pulmonar fixo usando o princípio de Arquimedes. Coloque os pulmões na água e pressione-o com um dispositivo com fio. Observe o peso da água deslocada pelos pulmões submersos. A fração do volume pulmonar no pulmão esquerdo fixo é geralmente menor do que a medida in vivo.

- Antes de iniciar o procedimento, dobre manualmente a ponta de uma cânula intravenosa comercial de calibre 20 de 1 polegada de comprimento em uma ligeira curva. Então, depois de confirmar a anestesia por falta de resposta ao beliscão do dedo do pé, aplique pomada nos olhos de um camundongo adulto e prenda o camundongo na posição supina em uma plataforma inclinada com um grande fichário de escritório e alças de sutura. Raspe a parte ventral do pescoço e desinfete a pele com álcool 70%. Em seguida, usando uma tesoura afiada, faça uma pequena incisão cirúrgica no pescoço, aproximadamente 12 milímetros abaixo do incisivo inferior.

Em seguida, use uma pinça para puxar suavemente a pele do pescoço caudalmente até que a parede ventral da traqueia possa ser vista. Em seguida, retraia suavemente a língua e insira a cânula com a ponta dobrada inclinada em direção à superfície ventral do mouse. Puxando suavemente a pele do pescoço novamente, como acabamos de demonstrar, insira a cânula na traqueia. Quando o cateter puder ser observado na traqueia, avance o cateter cerca de 5 milímetros para passar as cordas vocais.

Agora coloque a ponta de uma pipeta de carregamento de gel carregada com 50 microlitros do instilado no cubo inferior do cateter. Confirme o movimento do fluido na ponta em sincronia com a respiração do mouse e, em seguida, injete o instilado. Usando uma seringa de 1 mililitro, infle imediatamente os pulmões com 0,6 mililitros de ar através do cateter para ajudar a distribuir o líquido profundamente nos pulmões e, em seguida, remova a cânula. Feche a ferida cirúrgica com uma pequena quantidade de adesivo de cianoacrilato e coloque o camundongo em uma gaiola individual com monitoramento até que esteja totalmente recuperado.

Após o ponto final do experimento, faça um pequeno corte no pescoço do animal para expor o lado ventral da traqueia. Em seguida, insira uma ponta de agulha de calibre 18 na traqueia. Usando linha, amarre a agulha na traqueia e abra cuidadosamente o tórax com uma incisão na linha média. Em seguida, corte o diafragma e remova as paredes laterais do tórax para expor o pulmão. Em seguida, certifique-se de que não haja ar no tubo de fixação, passando formaldeído no final da torneira. Em seguida, conecte o reservatório de formalina e o tubo cheio diretamente à extremidade inferior da agulha de traqueostomia.

Coloque a superfície superior do formaldeído 25 centímetros acima do nível da boca e abra a torneira para inflar os pulmões com um fixador. Depois de deixar os pulmões sob pressão por pelo menos 20 minutos, puxe lentamente a agulha para expor mais da traqueia não canulada enquanto amarra a traqueia além da extremidade da agulha de topo. Quando a traqueia estiver bem amarrada, remova a torneira e disseque cuidadosamente os pulmões. Em seguida, coloque os pulmões em formaldeído durante a noite.

Aqui, é mostrado um dispositivo típico para manter os pulmões no lugar durante o volume pulmonar fixo feito de pipetas de plástico e fio fino de calibre 20. Para medir o volume pulmonar fixo, primeiro disseque o coração e qualquer outro tecido não pulmonar dos pulmões. Em seguida, coloque um béquer contendo aproximadamente 200 mililitros de água equipado com um dispositivo de suporte de fio em uma balança e tara o equipamento.

Em seguida, remova o dispositivo, coloque o pulmão na superfície da água e use o dispositivo para pressionar o tecido sob a água, tomando cuidado para que o pulmão, a sutura ou qualquer parte do dispositivo não toque nas laterais ou no fundo do copo. Registre o peso na balança. Esse número reflete o volume de água deslocado e, portanto, é uma medida direta do volume pulmonar. Em seguida, seque o pulmão num limpa-vidros, tara novamente o copo com o dispositivo e repita a medição do volume pulmonar. As duas medições de volume devem então ser calculadas a média.