Preservação de tecido embebido em parafina fixada em formalina (FFPE): um método para estudar a morfologia do tecido

- Primeiro, coloque uma fatia de tecido em um papel de filtro embebido em PBS para evitar o encolhimento ou inchaço das células, equilibrando a osmolaridade. Transfira o tecido para um histo. Feche e coloque o em formalina tamponada neutra, solução NBF. O NBF contém formaldeído que se liga a grupos amino de aminoácidos e previne a formação de ácido fórmico que pigmenta o tecido. Deixe o durante a noite a uma temperatura baixa, o que evita a degradação do ácido nucleico e fixa o tecido. Desidrate o tecido com várias lavagens de álcool.

Coloque-o em parafina líquida e pressione-o até o fundo do molde. Remova o peso e coloque a parte inferior do histo no tecido. Despeje parafina líquida no conjunto. Deixe a configuração solidificar em uma placa fria. A parafina é insolúvel em água e, após entrar no tecido desidratado, endurece e ajuda no seccionamento. Transfira o bloco de tecido em um micrótomo. Corte e colete seções finas do tecido em uma lâmina. Se a seção for muito espessa, o oxigênio e outros nutrientes não podem se difundir pela fatia, criando um falso gradiente de necrose. Se a seção for muito fina, ela tende a enrolar. O vídeo do protocolo examina a expressão de biomarcadores