Eletroporação de Organoides: Um Método para Transfectar DNA de Plasmídeo em Organoides Gastrointestinais

- Organoides são pequenas culturas de células tridimensionais derivadas de células-tronco específicas de tecidos. Eles são genomicamente estáveis, mas geneticamente modificáveis por meio de transfecção e, portanto, ideais para investigação genética. Para a transfecção, semeie organoides em uma placa de cultura multipoços com um meio de cultura específico e incube pela duração desejada. Em seguida, adicione uma mistura de dissociação à placa para ajudar na dissociação das células organoides. Transfira a mistura para um tubo e centrifugue. Ressuspenda o pellet organoide em um tampão de eletroporação contendo DNA de plasmídeo marcado com fluorescência. O tampão estabiliza as células e evita a morte celular devido ao estresse elétrico.

Transfira a mistura para uma cubeta e eletropore as células. Impulsos elétricos através da membrana celular resultam na formação temporária de poros para facilitar a absorção do DNA do plasmídeo na célula. Após a eletroporação, adicione imediatamente o meio de cultura à suspensão celular e transfira a mistura para um tubo. Agora, centrifugue as células. Ressuspenda o pellet na matriz do embasamento e transfira para a placa multipoços para polimerização.