Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:21 min. • April 30th, 2023
- A porção exócrina do pâncreas constitui células acinares e células ductais. As células acinares sintetizam e secretam enzimas digestivas em seu lúmen. As células ductais revestem o tubo que fornece essas enzimas ao intestino delgado. Para se adaptar ao estresse genético e ambiental, as células acinares sofrem conversão morfológica e funcional em células semelhantes a ductos, denominadas metaplasia acinar-ductal, ou ADM.
Às vezes, a ADM pode levar ao aparecimento de câncer de pâncreas. Para induzir a ADM ex vivo, prepare uma suspensão de células de colágeno resfriada combinando células acinares primárias com gel de colágeno mantido em gelo para evitar a solidificação da matriz. Trate a suspensão com um estimulante ou inibidor ADM de teste de interesse.
Distribua a suspensão em uma placa de cultura e incube para facilitar a solidificação do colágeno e incorporar as células dentro. Em seguida, pipete um volume adicional de meio contendo o estimulante ou inibidor ADM de teste de interesse sobre a camada de células de colágeno solidificadas.
Incubar a placa durante um período adequado. Com a indução da metaplasia acinar-ductal, as células acinares primárias em forma piramidal se transdiferenciam para formar células com morfologia semelhante a células do ducto. No protocolo a seguir, demonstraremos a indução ex vivo da metaplasia acinar-ductal em células acinares murinas primárias usando TGF alfa como estimulante.
- Para fazer um gel de colágeno, combine 7 mililitros de colágeno de cauda de rato tipo 1, 700 microlitros de 10 vezes o meio de Waymouth e 466,6 microlitros de hidróxido de sódio 0,34 molar em um tubo de 50 mililitros no gelo para fazer gel de colágeno. Em um tubo de 50 mililitros, misture volumes iguais de suspensão celular e gel de colágeno após três horas de incubação e misture suavemente. Coloque 2.000 microlitros, um poço de cada vez, em uma placa de seis poços, mantendo a placa no gelo, e gire para distribuir uniformemente a camada de células de colágeno.
Para solidificar o meio, incube a placa em uma incubadora de cultura de células a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 30 minutos. Em seguida, adicione 1,5 mililitros por poço de 1 vezes o meio completo do Waymouth com o estímulo ou inibidores desejados.
Mude o meio no dia seguinte e depois em dias alternados. Dependendo do estímulo utilizado, a metaplasia acinar-ductal, ou ADM, pode ser observada entre o terceiro e o quinto dia.