Isolamento de ilhotas pancreáticas por meio de perfusão de colagenase: um método enzimático para isolar células de ilhotas pancreáticas

- As células das ilhotas no pâncreas produzem hormônios essenciais envolvidos nas funções endócrinas. Para isolar ilhotas, primeiro, prenda um camundongo sacrificado e exponha cirurgicamente sua cavidade abdominal. Escove o fígado e os intestinos para localizar e prender o ducto biliar comum. Identifique a ampola de Vater, o ducto formado pela união dos ductos biliares pancreático e comum.

Em seguida, injete uma solução de enzima colagenase no ducto biliar comum. O refluxo do ducto infla com sucesso o pâncreas, facilitando a dissociação dos tecidos pancreáticos induzida pela colagenase. Extirpar o pâncreas num tubo contendo mais solução de colagenase. Pique mecanicamente o tecido e incube para ajudar na digestão do tecido pela colagenase.

Depois de obter uma suspensão homogênea, interrompa a digestão enzimática adicionando uma solução contendo proteínas que inibem a atividade da colagenase. Centrifugue para coletar um grânulo de tecido. Ressuspenda o pellet em um meio de gradiente de densidade apropriado, coloque um tampão adequado sobre ele e centrifugue para gerar camadas de gradiente.

Colete ilhotas da camada formada entre o meio de gradiente de densidade e o buffer. Finalmente,