Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:29 min. • April 30th, 2023
- Os esferoides são modelos tridimensionais de cultura de células in vitro. Para coloração imunofluorescente, primeiro, gere uma cultura esferóide do tipo de célula necessário em uma placa multipoços. Usando uma micropipeta com ponta de orifício largo, colete os esferoides, tomando cuidado para evitar a ruptura devido às forças de cisalhamento.
Em seguida, fixe e permeabilize os esferoides para tornar as células individuais permeáveis. Agora, incube com uma solução contendo proteínas para bloquear locais de interação de proteínas não específicas na superfície celular. Trate os esferóides com um coquetel de anticorpos primários desejado. Incube para que os anticorpos se liguem às moléculas-alvo na superfície da célula.
Em seguida, rotule os esferoides com uma solução de anticorpo secundário marcada com fluorescência específica para os anticorpos primários. Finalmente, trate os esferóides com um corante fluorescente de ligação ao DNA adequado para corar os núcleos das células. Usando um microscópio de fluorescência de varredura a laser, obtenha imagens de várias seções transversais ópticas do esferóide em diferentes planos ópticos.
As imagens capturadas refletem núcleos marcados com
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos