Detecção de ROS com coloração DCFH-DA: Medindo ROS totais em linhagens de células de câncer colorretal

- As espécies reativas de oxigênio são produzidas predominantemente a partir das mitocôndrias quando os elétrons vazam da cadeia de transporte de elétrons. Esses elétrons se combinam com o oxigênio molecular, dando origem a várias espécies reativas de oxigênio, ou ROS. Nas células cancerígenas, há superprodução de espécies reativas de oxigênio. Essas moléculas de ROS altamente reativas podem danificar oxidativamente membranas, proteínas e DNA dentro da célula.

Níveis aumentados de ROS danificam o DNA, levando à ativação de uma via de sinalização oncogênica que causa a progressão do câncer. Portanto, é vital detectar os níveis de espécies reativas de oxigênio produzidas pelas células cancerígenas.

Comece retirando células cancerígenas do câncer colorretal humano em um meio de cultura apropriado. Em seguida, semeie essas células em uma placa de vários poços e adicione a solução de DCFH-DA. Incube a placa pela duração desejada. DCFH-DA atravessa a membrana celular. Uma vez dentro da célula, o DCFH-DA se converte em DCFH na presença de uma enzima esterase celular. Além disso, a oxidação do DCFH por espécies reativas de oxigênio produz moléculas fluorescentes verdes.

Observe as células