Isolamento de DNA microbiano de fezes: estudando o efeito do enriquecimento ambiental na diversidade do microbioma em modelo de tumor murino

- O enriquecimento ambiental, ou EE, refere-se às modificações nos parâmetros do alojamento para obter efeitos benéficos em várias doenças, como o câncer. Em um camundongo portador de tumor, o EE ativa o sistema imunológico e reduz a inflamação, o que melhora a microbiota intestinal e melhora a taxa de sobrevivência. Para estudar as mudanças na microbiota intestinal, adicione a quantidade desejada de tampão de lise fecal em um tubo contendo as fezes do camundongo.

Centrifugar a amostra e transferir o sobrenadante para um novo tubo de microcentrífuga. Adicione tampão de lise de cloreto de guanidínio que desnatura DNase e RNase. Em seguida, adicione etanol e transfira a amostra para uma coluna de centrifugação de sílica.

O etanol ajuda o DNA a se ligar à sílica. Centrifugue a amostra. Agora, transfira a coluna para um novo tubo de microcentrífuga e adicione um tampão de eluição à coluna para eluir o DNA.

Centrifugar a amostra e rejeitar a coluna. Transfira a amostra para um tubo de PCR e execute a PCR para amplificar o DNA. Carregue o DNA no gel de agarose e realize eletroforese para quantificar o tamanho do DNA microbiano. No protocolo a seguir, isolaremos o DNA das fezes para anali