Estabelecendo modelo de camundongo com metástases experimentais: implantando células organoides CRC que expressam GFP no modelo PDX para detectar micrometástases

- As micrometástases são um pequeno grupo de células cancerígenas que se desprendem de um tumor primário e se espalham para diferentes partes do corpo através do sangue ou dos gânglios linfáticos. Para detectar micrometástases, suspenda as células organoides do câncer colorretal no PBS para manter o pH e carregar a suspensão celular em uma seringa. Em seguida, coloque um camundongo anestesiado em decúbito ventral em uma cama cirúrgica. Faça uma pequena incisão com uma tesoura na parte inferior do flanco esquerdo e exponha o baço. Puxe suavemente o baço para fora usando uma pinça e injete lentamente a suspensão celular no baço. Feche a incisão com suturas e retorne o animal à gaiola. Monitore-o até que ele se recupere.

Após o período desejado de injeção, sacrifique o camundongo para dissecar tumores primários e diferentes tecidos. Observe os tecidos dissecados sob um microscópio de fluorescência. As células cancerígenas que expressam GFP desenvolvem um tumor primário no local injetado no baço. Algumas células cancerígenas do tumor primário se movem para um órgão diferente, geralmente o fígado, para formar colônias micrometastáticas. No protocolo a seguir, estabeleceremos um modelo experimental de metástases em camundongos de células organoides de câncer colorretal que expressam GFP.

- Para estabelecer um modelo experimental de metástase de xenoenxertos tumorais derivados de pacientes com CCR, dilua as suspensões de células tumorais únicas em uma concentração de 4 vezes 10 para as células por 50 microlitros e carregue 50 microlitros de células por camundongo em uma seringa equipada com uma agulha de calibre 22. Coloque o primeiro camundongo NOG anestesiado em decúbito ventral na bancada e faça uma pequena incisão na região inferior do flanco esquerdo.

Use tesouras e pinças estéreis para cortar cuidadosamente o peritônio e expor o baço, e use a pinça para agarrar a gordura presa ao baço. Em seguida, injete lentamente 50 microlitros da suspensão de células tumorais no baço, tomando cuidado para que nenhum vazamento seja observado.

Depois que todos os camundongos tiverem sido injetados e suturados conforme necessário, devolva os animais às gaiolas de origem e verifique se há vazamento e viabilidade da sutura um dia após a entrega das células tumorais. Use paquímetros para medir os tumores semanalmente, colhendo os tumores primários e tecidos relevantes até os pontos finais experimentais apropriados. Transfira os tumores e órgãos dissecados para 5 mililitros de PBS gelado em uma placa de Petri de 10 centímetros no gelo e observe os tecidos dissecados sob um microscópio de estereofluorescência para avaliar sua expressão de GFP.