Infecção Segmentar por Adeno-Cre: Uma Técnica para Gerar Câncer Colorretal Isolado usando Modelos de Camundongos Geneticamente Modificados

- Comece tomando um camundongo mutante condicional anestesiado com um genoma modificado carregando sequências específicas de reconhecimento da enzima Cre-recombinase chamadas inserções LoxP que flanqueiam o gene supressor de tumor desejado a ser mutado. Exponha cirurgicamente a cavidade abdominal. Localize o cólon distal e prenda sua porção superior. Insira transanalmente um tubo de grau médico e avance-o para o cólon distal. Lave o cólon com solução salina para remover qualquer matéria fecal. Substitua o tubo. Prenda a região inferior do cólon para segmentação. Encha o segmento usando uma solução de dissociação celular adequada. Isso perfura a barreira mucosa e aumenta a acessibilidade das células da cripta intestinal. Lave a solução de dissociação.

Em seguida, injete uma suspensão adenoviral no segmento do cólon. Esses vetores virais projetados codificam enzimas Cre-recombinase. O vírus entra na célula, libera seu DNA no núcleo e expressa as enzimas. As proteínas reconhecem as inserções de LoxP no genoma do hospedeiro e catalisam a recombinação específica do local, inativando assim o gene supressor de tumor. Essa mutação de perda de função promove a progressão do câncer. Suture a