Ensaio de ligação de microtúbulos em células CRC: um método para examinar a proteína Tau de ligação de microtúbulos em células de câncer colorretal

- Tau é uma proteína associada a microtúbulos envolvida na estabilização e montagem dos microtúbulos. Muitas células cancerígenas expressam proteína tau hiperfosforilada, que não consegue manter uma ligação de microtúbulos bem organizada. Para estudar a interação entre a proteína tau e os microtúbulos, adicione lisado de células cancerígenas contendo proteína tau e uma solução de trabalho de microtúbulos em um tubo de microfúgio.

As proteínas tau não fosforiladas presentes no lisado celular se ligam aos microtúbulos. Agora, adicione a quantidade desejada de tampão PEM no tubo para estabilizar a atividade da tubulina, uma proteína que polimeriza em filamentos para formar microtúbulos. Incube a mistura pela duração desejada.

Centrifugue a mistura para pellet a proteína ligada aos microtúbulos. A proteína não ligada permanece no sobrenadante. Transferir o sobrenadante para um novo tubo e voltar a suspender o sedimento num tampão adequado. Adicione um tampão de carregamento de gel à suspensão de pellets ressuspensa e execute as amostras em um gel de poliacrilamida para separar a proteína ligada aos microtúbulos e eletroblot em uma membrana adequada.

Adicione anticorpos adequados e dese