Isolamento CTC de uma amostra de sangue total: um método para obter CTCs de modelo de câncer colorretal murino

- Células tumorais circulantes, ou CTCs, são as células cancerígenas que se originam do tumor primário e entram na circulação sanguínea. A maioria das CTCs pode sobreviver na corrente sanguínea sem se fixar na superfície; portanto, podemos detectá-los diretamente do sangue da maioria dos pacientes com câncer.

As CTCs no sangue podem indicar a disseminação do tumor dentro do corpo, portanto, identificá-las ajuda a entender a progressão do câncer. Comece tomando um modelo de camundongo com câncer colorretal anestesiado e obtenha sangue por punção cardíaca. Transfira o sangue para um tubo cônico contendo meio de gradiente de densidade e centrifugue para separar os componentes do sangue.

Rejeitar a camada superior que contém plasma e recolher a fracção de células mononucleares do sangue periférico, ou PBMC, presente na interface num tubo separado. Em seguida, adicione o anticorpo anti-EpCAM às células PBMC e observe sob um microscópio fluorescente. As CTCs circulantes expressam um marcador celular conhecido como Molécula de Adesão Celular Epitelial ou EpCAM. Portanto, os anticorpos anti-EpCAM podem ajudar a identificar CTCs positivas para EpCAM.

Colete as CTCs e armazene-as para anális