Microdissecção a laser: uma técnica para isolar células invasoras de câncer colorretal a partir de um modelo de cultura organotípica 3D

- Modelos organotípicos 3D de câncer colorretal são culturas in vitro projetadas para imitar microambientes tumorais in vivo. A cultura geralmente contém células estromais, como fibroblastos, co-cultivadas com células epiteliais do câncer colorretal, em um microambiente de matriz extracelular adequado.

Em culturas estabelecidas, células tumorais com potencial metastático invadem a matriz extracelular. Para isolar essas células invasoras, primeiro trate o modelo organotípico com formaldeído para fixar as células e a matriz extracelular. Incube com álcool para desidratar a amostra.

Em seguida, incorpore em cera de parafina líquida para gerar um bloco de tecido. Use um ultramicrótomo para obter seções em fatias finas. Monte as seções em uma lâmina de vidro apropriada.

Adicione xileno para desparafinizar as seções. Sequencialmente, incubar as seções em concentrações decrescentes de etanol para reidratar as amostras.

Trate com Cresyl Violet para corar e diferenciar as células cancerígenas colorretais do microambiente. Coloque a lâmina de vitral voltada para baixo na platina do microscópio. Usando o software apropriado, identifique as células a serem microdissecadas e delineie as bordas.