Ensaio de citometria de tração: um método para quantificar a força de tração exercida por células cancerígenas na ECM

- As células geram forças mecânicas que atuam em uma matriz extracelular. Essa força é chamada de força de tração. As células exercem forças de tração para realizar várias tarefas, como migração e proliferação.

As células cancerígenas metastáticas exercem maiores forças de tração do que as células saudáveis; portanto, realizamos um ensaio de citometria de tração para medir as forças de tração exercidas pelas células em substratos elásticos. Comece semeando a quantidade desejada de células cancerígenas do cólon em um hidrogel de poliacrilamida, um gel que imita a ECM in vitro. O gel é composto por proteínas de fibronectina, que ajudam as células a aderir à superfície, e esferas fluorescentes, que atuam como um marcador de mudanças de posição.

Incube as células pelo período desejado. As células aderem ao gel e exercem a força de tração, o que causa o deslocamento das esferas fluorescentes. Agora, coloque a placa sob um microscópio fluorescente e tire uma imagem das esferas fluorescentes deslocadas. Em seguida, adicione a quantidade desejada de tripsina à placa para separar as células e analise a força de tração exercida pelas células usando o software apropriado. No protocolo a segui