Ensaio de citometria de tração: um método para quantificar a força de tração exercida por células cancerígenas na ECM

- As células geram forças mecânicas que atuam em uma matriz extracelular. Essa força é chamada de força de tração. As células exercem forças de tração para realizar várias tarefas, como migração e proliferação.

As células cancerígenas metastáticas exercem maiores forças de tração do que as células saudáveis; portanto, realizamos um ensaio de citometria de tração para medir as forças de tração exercidas pelas células em substratos elásticos. Comece semeando a quantidade desejada de células cancerígenas do cólon em um hidrogel de poliacrilamida, um gel que imita a ECM in vitro. O gel é composto por proteínas de fibronectina, que ajudam as células a aderir à superfície, e esferas fluorescentes, que atuam como um marcador de mudanças de posição.

Incube as células pelo período desejado. As células aderem ao gel e exercem a força de tração, o que causa o deslocamento das esferas fluorescentes. Agora, coloque a placa sob um microscópio fluorescente e tire uma imagem das esferas fluorescentes deslocadas. Em seguida, adicione a quantidade desejada de tripsina à placa para separar as células e analise a força de tração exercida pelas células usando o software apropriado. No protocolo a seguir, realizaremos um ensaio de microscopia de força de tração para analisar a tração celular de células de câncer de cólon humano.

- Para realizar o ensaio de microscopia de força de tração, primeiro, aqueça a solução de tripsina-EDTA 10% SDS a 0,25% a 37 graus Celsius em banho-maria por 10 minutos antes do início do experimento de tração. Remova um gel de cada vez da incubadora de cultura de células e coloque no microscópio stage. Depois de encontrar uma única célula no campo de visão, remova a tampa da placa de Petri e tire uma imagem de contraste de fase da célula.

Em seguida, mude o modo de imagem para fluorescência e selecione o filtro apropriado. Não mova o estágio do microscópio ou a amostra durante esse período. Em seguida, tire uma imagem das esferas fluorescentes deslocadas pela tração celular. Agora, adicione 1 mililitro de solução de tripsina SDS à placa de Petri para separar a célula do gel. Tire uma imagem de referência das contas depois que a célula for removida.