Ensaio de Organização de Citoesqueleto e Adesão Focal: Um Método Baseado em Imunofluorescência para Estudar a Adesão e Espalhamento Celular em Substratos

- A morfologia do substrato influencia muito o comportamento e as respostas metastáticas das células cancerígenas. Uma rede dinâmica de citoesqueleto de actina fornece suporte estrutural às células e medeia o movimento celular. Grandes complexos de proteínas associados à membrana, chamados aderências focais, conectam o citoesqueleto à matriz extracelular, facilitando a disseminação celular.

Para começar a colorir, pegue uma cultura de células cancerígenas e trate-as com paraformaldeído para fixar e permeabilizar as células. Agora, incube as células com um reagente intensificador de sinal contendo proteínas para preparar as células para reduzir a coloração de fundo. Adicione anticorpos primários anti-vinculina que se ligam à vinculina, uma das proteínas dentro do complexo de adesão focal.

Em seguida, incube a amostra com um anticorpo secundário conjugado com corante fluorescente direcionado ao anticorpo primário. Finalmente, trate as células com conjugados de faloidina marcados com fluorescência que se ligam seletivamente aos filamentos de actina do citoesqueleto. Observe as células sob um microscópio confocal de varredura a laser para estudar seus sinais fluorescentes.

Células com