Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:02 min. • April 30th, 2023
- Em modelos experimentais de camundongos com câncer, o câncer induzido no animal se assemelha ao câncer humano no fenótipo. Eles fornecem uma plataforma eficiente para avaliar a eficácia de terapias potenciais. Para induzir um modelo de carcinogênese da pele em duas etapas, primeiro, prepare um camundongo anestesiado imunocomprometido na posição prona. Raspe o pelo para expor a pele subjacente. Na primeira etapa, aplique um potente agente iniciador de tumor na pele dorsal exposta.
Esses folículos pilosos em sua fase de repouso ou telógena abrigam glândulas sebáceas inativas. A falta resultante de fluxo de sebo permite o acúmulo do composto dentro desses folículos pilosos. O composto se difunde nas células circundantes e induz a mutação do gene alvo, principalmente nas células-tronco do folículo piloso ou nas células-tronco primárias dos queratinócitos. A expressão gênica alterada causa a iniciação tumoral nessas células.
Na segunda etapa, aplique um agente promotor de crescimento tumoral adequado na pele dorsal repetidamente durante os intervalos de tempo desejados. O produto químico estimula a expansão da população de células iniciada. A proliferação celular contínua leva à formação de conseqüências cancerígenas chamadas papilomas.
No protocolo a seguir, mostramos a geração de um modelo de camundongo de carcinogênese cutânea em dois estágios usando os produtos químicos DMBA, um mutagênico, e TPA, um agente promotor de crescimento.
- Antes de iniciar o experimento, aloje todos os camundongos agressivos de 7 a 9 semanas em gaiolas separadas para evitar brigas e lesões na pele. Para a indução do papiloma cutâneo, primeiro, raspe as peles posteriores dos animais experimentais e pese os camundongos individualmente. Quarenta e oito horas após o barbear, use uma pipeta para aplicar 50 microgramas de DMBA em 200 microlitros de acetona na área raspada de cada camundongo anestesiado.
Para promoção do papiloma cutâneo, sete dias após a aplicação do DMBA, tratar a pele com 5 microgramas de TPA em 200 microlitros de acetona, duas vezes por semana até o final do experimento. Examine os animais em busca de papilomas e fotografe e registre o tamanho de cada papiloma individual em um mapa, todas as semanas.
Uma massa palpável maior que 1 milímetro de diâmetro é considerada um papiloma se permanecer por mais de uma semana.