Preparação de vírion de poliomavírus de células de Merkel recombinante (MCPyV): uma técnica para produzir vírion MCPyV recombinante de alto título

- O poliomavírus de células de Merkel, ou MCPyV, é um oncovírus de DNA de fita dupla com um genoma circular que causa o carcinoma de células de Merkel, um tipo de câncer de pele. Para preparar vírions MCPyV, primeiro, trate uma cultura aderente de células de empacotamento com um coquetel contendo um agente de transfecção, o genoma viral e dois plasmídeos de expressão que codificam proteínas necessárias para promover a replicação viral.

Durante a incubação, o reagente de transfecção forma lipoplexos com os plasmídeos, facilitando sua entrega nas células de embalagem. Uma vez dentro do núcleo, a maquinaria celular permite a expressão dos genomas virais e plasmidiais. Os plasmídeos de expressão codificam proteínas de antígeno de tumor grande e antígeno de tumor pequeno. Essas proteínas se translocam para o núcleo e impulsionam a replicação do DNA viral. Posteriormente, o genoma viral codifica proteínas estruturais do capsídeo. Essas proteínas se movem para o núcleo e ajudam na montagem de vírions recombinantes.

Em seguida, colha as células cultivadas. Trate-os com uma solução contendo detergente e DNase. O detergente lisa as células para liberar os vírus. A DNase degrada qualquer DNA