Ensaio de formação de colônias de queratinócitos: um ensaio in vitro para avaliar a capacidade dos queratinócitos de se transformarem em colônias

- O ensaio de formação de colônias determina a capacidade de células individuais de proliferar e formar colônias. Comece com uma pele dorsal de camundongo excisada em uma placa de cultura. Raspe o tecido subcutâneo e a gordura do lado ventral da pele. Trate o tecido com uma solução de digestão. As enzimas proteolíticas na solução degradam a matriz extracelular, induzindo a dissociação das células epidérmicas.

Raspe suavemente a camada epidérmica para liberar as células e cabelos dissociados em um meio de colheita. Filtre a suspensão através de um filtro apropriado para prender os pelos ou quaisquer detritos e obter uma suspensão unicelular de células epidérmicas. Transfira o volume desejado desta suspensão celular para uma placa revestida de colágeno contendo uma camada aderente de células alimentadoras com crescimento interrompido. Suplemento com um meio adequado que favoreça a sobrevivência dos queratinócitos.

Durante a cultura, os queratinócitos se ligam à camada de alimentação. Além disso, essas células alimentadoras secretam fatores de crescimento e sintetizam proteínas da matriz extracelular que suportam o crescimento de queratinócitos. Dependendo da capacidade proliferativa