Transgênese baseada em vetor miniCoopR: uma técnica para rastrear genes indutores de melanoma em modelo de tumor de peixe-zebra

- No peixe-zebra, o melanoma surge da transformação maligna dos melanócitos - as células produtoras de melanina. Para estudar o início do melanoma, use um modelo de peixe-zebra transgênico com deficiência de melanócitos e propenso a melanoma. Este modelo não possui melanócitos devido a uma mutação de perda de função em seu promotor mitfa específico para melanócitos.

Comece pegando um embrião unicelular deste modelo transgênico em uma placa de ágar. Co-injete uma mistura contendo um vetor miniCoopR baseado em transposon e mRNAs da enzima transposase no embrião. O vetor contém um de genes, compreendendo um minigene mitfa portador de promotor acoplado a um gene candidato imprensado entre dois elementos de transposon.

Os mRNAs co-injetados codificam proteínas transposase. Essas proteínas atuam nos elementos do transposon e catalisam a excisão do do vetor miniCoopR, seguida de sua integração no DNA genômico do embrião. Posteriormente, o promotor do conduz a expressão do gene mitfa e do gene candidato de interesse.

O gene mitfa suporta o resgate e o desenvolvimento dos melanócitos, enquanto o gene candidato, se oncogênico, induz o aparecimento do melanoma. Rastreie o peixe-zebra desenvol