Coloração de anticorpos de melanócitos de escamas: uma técnica para detectar fatores de transcrição expressos em melanócitos associados a escamas dorsais de modelos de peixe-zebra

- Os fatores de transcrição são proteínas que contêm domínios de ligação ao DNA. Eles se ligam a sequências específicas de DNA e ajudam a regular a expressão gênica nas células. Para detectar a expressão do fator de transcrição em melanócitos associados a escamas, primeiro colha escamas dorsais pigmentadas escuras de um peixe-zebra anestesiado. Fixe as escamas e trate-as com uma solução de permeabilização para tornar os melanócitos individuais permeáveis.

Trate com uma solução de alvejante para remover os grânulos de pigmento de melanina escura das células. Este processo de branqueamento elimina as chances de sinais de fundo associados ao pigmento durante as etapas de coloração subsequentes. Incube com uma solução de bloqueio contendo proteínas para bloquear locais de ligação de proteínas não específicos na superfície celular.

Agora, trate a amostra com os anticorpos primários desejados. Esses anticorpos se ligam aos seus fatores de transcrição alvo dentro das células. Em seguida, rotule a amostra com anticorpos secundários marcados com fluorescência específicos para os anticorpos primários. Além disso, trate a amostra com um corante de ligação de DNA fluorescente apropriado para c