Pseudofracture: Um Modelo de trauma agudo do tecido periférico

Quando um osso longo, como um fêmur ou tíbia, é fraturado, o músculo e o tecido mole lesionados são expostos a fragmentos ósseos danificados e medula óssea. Isso é seguido por uma forte resposta imune para ajudar no reparo do tecido. Um modelo para estudar os efeitos dessa exposição pode ser gerado pela coleta de fêmures e tíbia.

De um camundongo doador. Os ossos são esmagados para criar uma solução óssea, que é então injetada na coxa lesionada de um camundongo receptor. As respostas imunes são então monitoradas e as lesões de órgãos remotos avaliadas para estudar os efeitos a longo prazo do trauma induzido por fratura.

A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes de trauma tecidual periférico, como o modelo de fratura bilateral do fêmur, é que esse modelo, o modelo de pseudofratura, permite a sobrevida a longo prazo sem complicações de anestesia prolongada ou técnicas intrincadas de fixação de fraturas e, portanto, permite o estudo das respostas imunes no final do trauma após o trauma. Antes de iniciar o procedimento, prepare os seguintes suprimentos: um balde de gelo, instrumentos cirúrgicos Betadine, hemostáticos GREs, uma pinça de almofariz e pilão, agulhas de calibre 20, uma seringa CC, anestesia PBS e um cone nasal de flúor isof. Uma única correspondência de idade e peso sacrificada.

O camundongo doador gênico deve fornecer material suficiente para três receptores. Prenda o doador em uma placa de acrílico, certificando-se de prender as extremidades inferiores apenas na ponta do pé. Depile cuidadosamente as extremidades inferiores.

Em seguida, cubra-os completamente com Betadine e álcool para esterilidade para remover os ossos longos da extremidade inferior, faça uma incisão cirúrgica na pele na região inguinal e continue a cortar a pele ao longo do comprimento da extremidade até o tornozelo, retraia a pele e disseque-a para longe da face subcutânea e do músculo, tanto no aspecto medial quanto no lateral. Em seguida, insira uma lâmina da tesoura sob os músculos anteriores e laterais à tíbia. Deslize a lâmina proximal e distalmente para levantar os músculos do osso subjacente.

Repita esta técnica na parte inferior posterior e medial da tíbia para separar os músculos abaixo da tíbia. Um esforço adicional mínimo deve ser usado na parte posterior ao deslizar distalmente para afastar a fíbula da tíbia na extremidade proximal desses músculos da perna. Corte os tendões o mais próximo possível de suas inserções e retraia os músculos distalmente enquanto puxa o grupo muscular juntos De forma descendente, um pequeno puxão liberará as inserções distais da articulação do tornozelo usando uma tesoura cortada na articulação do tornozelo.

Não desprenda a tíbia do fêmur neste ponto, essa conexão fornece uma alavanca adicional que ajudará na dissecção do fêmur da articulação do quadril. Use uma técnica semelhante para liberar os músculos do fêmur. Execute isso posteriormente e medial e lateralmente, se necessário.

Corte a inserção distal desses grupos musculares para liberá-los da articulação do joelho. Estenda a incisão na pele conforme necessário para obter uma exposição adequada e siga por baixo dos músculos. Para dissecar a extremidade do fêmur para fora da articulação do quadril, remova o fêmur e prenda a tíbia do camundongo doador e coloque-os em gaze estéril.

Separe os dois ossos na articulação do joelho simplesmente segurando cada osso em uma mão separada e torcendo ou girando suavemente os dois ossos em direções opostas ao longo de seus longos EAs. Para remover as inserções de tendão restantes dos ossos longos, enrole um pedaço de gaze de quatro por quatro ao redor do comprimento do osso. Segure com força e raspe todo o comprimento dos ossos várias vezes para remover os tecidos restantes da superfície.

Coloque os ossos coletados em um microtubo estéril de 1,5 mililitro no gelo. Transporte os ossos do doador para uma cabine de segurança biológica completamente desinfetada. Para preparação da solução óssea.

A coifa deve ser preparada com um curativo de campo estéril, um almofariz e pilão estéreis, um par de pinças estéreis, um tubo estéril de oito mililitros PBSA estéril de uma pipeta de mililitro com as respectivas pontas de pipeta. Um homem de pipeta de 100 microlitros com as respectivas pontas, seringas de um mililitro e agulhas de calibre 20 usando a pinça, transfere os ossos para o almofariz e usa o pilão para esmagar suavemente os ossos. Pipetar um mililitro de PBS na argamassa e continuar a esmagar os fragmentos restantes usando movimentos circulares para garantir a suspensão total da resus.

Em seguida, adicione mais um mililitro de PBS e continue esmagando para criar a solução óssea, que deve ter uma tonalidade rosa. Despeje lentamente a solução da argamassa no tubo de oito mililitros, garantindo que quaisquer restos maiores permaneçam para trás. Transfira a solução óssea para uma seringa de um mililitro.

Com uma agulha de calibre 20, a solução óssea deve permanecer no gelo. Pipete um microlitro da solução óssea em uma placa de congar Mac, espalhando uniformemente sobre a superfície. Incube a placa por 24 a 48 horas para garantir a esterilidade.

Inicie o procedimento cirúrgico para lesão de tecidos moles e injeção de solução óssea avaliando a profundidade da anestesia de um camundongo penta barbital anestesiado pelo dedo do pé. Beliscar. Coloque o camundongo em decúbito dorsal em uma placa de plexiglass e imobilize o animal enrolando frouxamente tiras finas de fita adesiva ao redor da porção distal de cada extremidade usando Oscar a cinco tesouras com uma lâmina tamanho 40. Depile as regiões abdominais, inguinais e coxas do animal.

Transfira o mouse para o campo cirúrgico estéril. Limpe a área cirúrgica com Betadine. Em seguida, limpe com álcool para esterilizá-lo.

Coloque um cone nasal no mouse contendo um pedaço de gaze com um mililitro de 99% de flúor. Assim que a respiração do animal começar a diminuir, remova o cone do nariz. Se for necessária anestesia adicional em qualquer parte do procedimento, pentobarbital adicional pode ser injetado ou administrado flúor.

Em seguida, dobre, um curativo de campo estéril e coloque-o no mouse para permitir a exposição apenas das extremidades inferiores e da cabeça. Esta lesão de tecidos moles é uma lesão bilateral por esmagamento dos membros posteriores. Certifique-se de que o mouse esteja posicionado com os membros posteriores ligeiramente abduzidos e girados lateralmente.

Isso ajuda na acessibilidade ao músculo correto. Agrupe os flexores do joelho para realizar a lesão por esmagamento Prenda um grande hemostático de 18 centímetros ao redor do ponto médio da musculatura posterior da coxa ao longo do fêmur com sua curva convexa voltada para o fêmur. Bloqueie o hemostático até o primeiro clique apenas por 30 segundos.

Insira a agulha através da pele de dois a três milímetros, pois a ponta do chanfro toca o fêmur. Injete 0,15 mililitro da solução óssea na musculatura da coxa esmagada de cada lado. Retire a agulha e coloque rapidamente um dedo enluvado estéril sobre o local da injeção para interromper qualquer refluxo da solução óssea para fora da ferida.

Mantenha este dedo lá por alguns segundos. Coloque o mouse de volta na gaiola e permita total liberdade de movimento diretamente à medida que a anestesia diminui. Apropriado. O controle da dor deve ser administrado quando o camundongo acorda.

Este esquema geral mostra a resposta imune bifásica após o trauma no ponto de tempo de zero hora. O trauma é induzido. Isso é seguido por uma resposta hiperinflamatória precoce que pode atingir o pico em seis horas e é medida por meio da avaliação da inflamação sistêmica e disfunção de órgãos remotos.

O segundo componente da resposta imune pós-traumática é uma imunossupressão tardia medida pela disfunção das células imunes e é descrita como um vale em torno de 48 horas. Este é um diagrama representativo da resposta inflamatória de citocinas no plasma que ocorre logo após o trauma e é um exemplo de inflamação sistêmica. A disfunção de órgãos remotos, medida por lesão hepática, é elevada em um período de tempo semelhante.

Este diagrama representativo é um exemplo para destacar a disfunção das células imunológicas tardiamente após o trauma. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de garantir a esterilidade e a manipulação precisa durante todo o experimento. Este não é um modelo de fratura verdadeira ou de infecção da ferida.