O método de cultura de embriões de roedores inteiro usando o Rotator do tipo Sistema de Cultura Garrafa
28 de agosto de 2010
Técnica de cultura todo embrião de rato permite-nos cultura e embriões de ratos Ex vivo Condição durante períodos limitados, correspondendo a fases midgestation. Neste protocolo de vídeo, demonstramos nossos procedimentos padrão de cultura de embriões de ratos após toda E12.5 usando o rotator-tipo de sistema de cultura de garrafa.
Na Biologia do Desenvolvimento, existem vários animais que são usados para o experimento. A técnica de agricultura Hor de embriões de podridão foi estabelecida na década de 1950 e desenvolvida antes do estabelecimento da manipulação genética moderna na agricultura havaiana. O diretor enfraquecido visa diretamente áreas de amor com matriz ou transfecção de genes, uma vez que os embriões podem ser manipulados e como um microscópio, portanto, toda a cultura embr é uma ferramenta muito útil.
Quando queremos estudar o processo de desenvolvimento dinâmico de embriões maorianos após o desenvolvimento pós-implantação. O crescimento dos embriões maorianos é criticamente dependente do apresentador funcional, o que limita o período de cultivo. Em geral, podemos cultivar embriões durante o período do dia embrionário 8,5 a 14,5 no rato e E 6,5 e 12,5 no camundongo.
Em laboratório, cultivamos embriões de ratos e camundongos usando um sistema de cultura rotativa. Este sistema de cultura é mais popular e adequado para a cultura de embriões de ratos e camundongos durante a gestação de chumbo. Isso é depois de E 11.5 e 9.5 em vermelho e camundongos.
Neste vídeo, gostaríamos de apresentar nosso protocolo padrão para cultura faminta usando embriões E 12.5 RU. Nessa condição, o embrião pode ser cultivado por dois dias, o que é bom o suficiente para examinar as várias manipulações eficazes na agricultura. Existem duas etapas críticas para o sucesso.
Primeiro, o procedimento de dissecção deve ser preciso para não danificar o embrião, especialmente os vasos de bastonetes. Em segundo lugar, o procedimento deve ser o mais rápido possível. Isso é especialmente verdadeiro para os embriões mais velhos.
Por exemplo, no caso dos embriões de camundongo E 10.5, eles devem ser transferidos em 30 minutos. Aplicamos a técnica de cultura de embriões inteiros para o pacote seis de embriões direitos mutantes. Por exemplo, analisamos o padrão de migração de células neurológicas no mutante amando um pequeno número de células com corante ou transplantando células de nível nos embriões do tipo branco e fundo mudo.
Além disso, estabelecemos um método de transferência de genes para camundongos cultivados e embriões vermelhos por eletrooperação que usa choque elétrico. Podemos simplesmente introduzir construções de genes exógenos, formas negativas dominantes e siRNAs na área dos cérebros em desenvolvimento. Portanto, podemos facilmente analisar as funções dos genes por meio de experimentos de perda de função e função de ganho.
Também investigamos o comportamento de células niveladas com GFP ou RFP usando cultura de órgãos ou cultura de fatias ou agricultura. Assim, você pode fazer uma variedade de experimentos usando a cultura Lio em combinação com outras técnicas.
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Visão Geral
Este protocolo de vídeo demonstra a técnica de cultura de embrião inteiro para embriões de rato após E12.5 usando um sistema de cultura em garrafa tipo rotador. Este método permite a cultura ex vivo durante estágios críticos de metade da gestação.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Biologia do Desenvolvimento
- Embriologia
- Técnicas de cultura ex vivo
Fundo
- A técnica de cultura de embrião inteiro foi estabelecida desde os anos 1950.
- Permite a manipulação de embriões para estudos genéticos.
- Embriões podem ser cultivados durante períodos de desenvolvimento específicos.
- O crescimento é dependente da presença funcional do embrião.
Propósito do Estudo
- Estudar processos de desenvolvimento dinâmico de embriões pós-implantação.
- Fornecer um procedimento padronizado para cultura de embrião inteiro.
- Facilitar pesquisas em biologia do desenvolvimento.
Métodos Usados
- Técnica de cultura de embrião inteiro
- Sistema de cultura em garrafa tipo rotador
- Condições ex vivo para embriões de rato
- Períodos de cultura do dia embrionário 8.5 ao 14.5
Principais Resultados
- Cultura bem-sucedida de embriões de rato após E12.5.
- Demonstração de procedimentos padrão para manipulação de embriões.
- Insights sobre os períodos críticos de crescimento dos embriões.
- Estabelecimento de um método confiável para estudos futuros.
Conclusões
- A técnica de cultura de embrião inteiro é uma ferramenta valiosa na biologia do desenvolvimento.
- Permite o estudo do desenvolvimento embrionário em condições controladas.
- Métodos padronizados aumentam a reprodutibilidade na pesquisa.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
The rotator-type whole embryo culture (WEC) system enables direct manipulation and observation of rodent embryos during critical midgestation stages, supporting mechanistic de-risking in early discovery. This ex vivo platform allows for precise genetic and cellular interventions, facilitating functional target validation and pathway interrogation before in vivo studies. Its reproducibility and adaptability make it a valuable asset for translational research and portfolio triage in developmental and disease modeling.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables direct genetic or cellular manipulation for functional target validation in mammalian embryos.
- Supports mechanistic de-risking by allowing loss- and gain-of-function studies in a controlled ex vivo system.
- Facilitates pathway clarification and hypothesis testing at key developmental inflection points.
- Provides a platform for evaluating the impact of candidate interventions on embryonic development.
Screening & Assay Development
- Prepares validated, manipulable embryonic systems for downstream phenotypic screening or mechanistic assays.
- Enables reproducible, quantitative assessment of developmental outcomes following genetic or chemical perturbation.
- Supports assay standardization and scalability for comparative studies across genotypes or interventions.
- Allows for reliable evaluation of compound or gene function in a physiologically relevant context.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant developmental stages for modeling congenital disorders or gene function.
- Provides continuity from discovery through preclinical validation by enabling mechanistic studies in intact embryos.
- Supports risk-adjusted advancement decisions by clarifying developmental liabilities early in the pipeline.
- Facilitates biomarker discovery and validation in a controlled, manipulable system.
Pipeline & Workflow Integration
The rotator-type WEC system bridges early discovery and preclinical research by enabling hypothesis-driven manipulation and quantitative analysis of embryonic development. Positioned between in vitro assays and in vivo models, it offers a unique platform for mechanistic studies and target de-risking.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification through direct genetic or cellular intervention.
- Screening: Provides assay-ready, reproducible embryonic systems for quantitative phenotypic readouts.
- Analytics: Enables measurement of developmental, migratory, or molecular outcomes for comparative analysis.
- Translational Research: Connects early mechanistic findings to preclinical disease modeling and biomarker validation.
- Enterprise Reuse: Offers a standardized, adaptable platform for repeated use across multiple discovery programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in target validation.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible, and scalable ex vivo workflows for developmental studies.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions and capital efficiency by clarifying biological risk early.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of discovery-stage assets.
Implementation Considerations
- Requires expertise in embryology, microdissection, and ex vivo manipulation techniques.
- Needs specialized rotator-type bottle culture instrumentation and microscopy infrastructure.
- Demands rigorous cross-team standardization for reproducibility and data comparability.
- Adaptation may be necessary for different rodent strains or developmental stages.
- Culture period is limited by embryonic dependence on placental function, restricting window of analysis.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:00
The Method of Rodent Whole Embryo Culture Using the Rotator-type Culture System
2:06
Setting up Whole Embryo Culture System
3:53
Removal of Embryos from the Uterus
2:52
Preparation of Culture Medium
4:52
Dissection of Rat Embryos
7:27
Results and Discussion
0:07
Introduction
