Determinação do Número celular durante Cultura Celular usando o contador de células Scepter

O contador de células do cetro é um dispositivo portátil automatizado para contagem de células, monitorando o diâmetro e o volume das células e verificando a saúde e a qualidade das populações celulares. Ele oferece vantagens significativas sobre outros métodos de contagem, incluindo maior precisão, facilidade de uso e baixo custo para contar células. Usando o cetro, siga as instruções em seu display gráfico para aspirar as células para o sensor descartável.

As células são então contadas e o dispositivo relata as concentrações e estatísticas das células, que podem ser carregadas em um computador e analisadas. Olá, sou Sonya. Eu sou um cientista pesquisador aqui em Millport, e hoje vou mostrar a vocês como usar o cetro.

Contador de células A contagem de células é uma etapa necessária, mas tediosa, para a cultura de células in vitro. Concentrações celulares consistentes garantem reprodutibilidade e precisão experimentais. A contagem de células é importante para monitorar a saúde celular e a taxa de proliferação, avaliar células imortais ou de transformação para experimentos subsequentes, transfecção ou infecção e preparação para ensaios baseados em células, apesar da necessidade de velocidade e precisão.

Na contagem de células, 71% dos 400 pesquisadores pesquisaram células de contagem usando um hemocitômetro. Embora a hemocitometria seja barata, ela é trabalhosa e sujeita a vieses e uso indevido do usuário, o que resulta em contagens imprecisas. As fontes de erro na hemocitometria incluem distribuição celular desigual na amostra, muitas ou poucas células na amostra.

Decisões subjetivas sobre se uma determinada célula se enquadra na área de contagem definida. Contaminação do hemocitômetro, variação do usuário e variação da taxa de enchimento do hemocitômetro para aliviar o tédio associado à contagem manual. 29%dos pesquisadores contam células usando dispositivos automatizados de contagem de células.

No entanto, para a maioria dos pesquisadores, o preço associado a esses grandes instrumentos de bancada é uma barreira ao seu uso. O contador de células de cetro é um dispositivo portátil automatizado que oferece a automação e a precisão da contagem de coter a um custo relativamente baixo em um formato portátil fácil de usar. O sistema emprega o princípio Coter de detecção de partículas baseada em impedância em um formato miniaturizado usando uma combinação de hardware analógico e digital para detectar processamento de sinal, armazenamento de dados e exibição gráfica.

O sensor descartável é projetado com uma zona de detecção de célula microfabricada que permite a discriminação por tamanho e volume de célula em resolução submicrônica e subpicotro, aprimorada com canais de manuseio de líquidos e eletrônicos de precisão. O contador de células do cetro exibe graficamente as estatísticas da população de células como um histograma a ser usado. O contador de células do cetro começa diluindo uma única suspensão celular de células em solução salina tamponada com fosfato.

Uma concentração de 10.000 a 500.000 células por mililitro é ideal. Transfira 100 microlitros de células diluídas para um tubo de microview de 1,5 mililitro. Ligue o contador de células do cetro pressionando e segurando o botão na parte de trás do instrumento e aguarde até que as instruções na tela apareçam.

Quando solicitado, conecte um sensor à extremidade da unidade de cetro com o painel de detecção de eletrodo voltado para a frente do instrumento. Os sensores Scepter consistem em uma câmara de amostragem moldada com precisão com uma zona de detecção eletrônica e eletrodos de detecção de células integrados. Os sensores possibilitam discriminar o tamanho da célula com resolução submicrônica e o volume da célula com resolução subpicolitros.

A engenharia consistente do sensor garante que volumes de amostra iguais sejam contados e medições precisas de tamanho sejam feitas. Depois que o sensor estiver conectado, execute cada etapa do processo de contagem de acordo com as instruções na tela da seguinte maneira. Quando a tela ler, mantenha pressionado o êmbolo para começar a pressionar o êmbolo, a tela lerá submergir o sensor, submergir o sensor na solução de suspensão da célula e liberar o êmbolo para aspirar a suspensão da célula no sensor.

O êmbolo atua como um sinal elétrico e atrairá a amostra mais o volume morto para o sensor. A velocidade ou precisão do mergulho não importa, como acontece com a pipetagem. Este processo levará vários segundos quando estiver pronto.

O instrumento emitirá um bipe e sample carregado será exibido na tela. Uma vez que a amostra é carregada no sensor, ela é puxada através da zona de detecção para avaliar o tamanho e o volume da célula. Então, através dos microcanais, uma vez que 50 microlitros de amostra são contados, o sensor diz ao instrumento para parar de contar.

Após a conclusão da contagem, a tela do instrumento exibirá a contagem concluída. Remova o sensor e descarte. Siga as instruções e remova e descarte o sensor.

O instrumento exibirá um histograma do tamanho ou diâmetro da célula em sua tela, bem como a concentração da célula por mililitro. Depois que a contagem for concluída e o histograma for exibido no instrumento, aplique portas pressionando o botão de alternância, selecione o portão automático ou use last para definir automaticamente a porta com base no perfil do histograma ou para usar as portas da contagem anterior. Independentemente da seleção, os portões podem ser movidos manualmente para fino.

Ajuste os dados, pressione o botão de alternância novamente para selecionar o portão esquerdo e role o botão para mover o portão conforme desejado. Em seguida, pressione o botão novamente para ativar o portão direito e role o botão para colocar o portão direito. Clique novamente.

Uma nova concentração de células, volume médio e diâmetro da célula serão exibidos. A alternância também pode ser para ambos os lados para alternar a exibição entre data e hora, tamanho médio da célula e volume médio da célula até 72 histogramas podem ser armazenados no próprio instrumento. Para carregar os dados em um computador pessoal, conecte o instrumento através da porta do cabo USB, na tela do PC.

Clique duas vezes no aplicativo de software cetro para iniciar o software. Em seguida, clique em conectar. Todas as contagens serão automaticamente transferidas para o software.

O software aplicativo do cetro exibe o histograma detalhando a distribuição populacional da cultura em volume ou diâmetro. Os arquivos baixados podem ser exportados para o Microsoft Excel, onde os dados brutos serão exibidos em compartimentos de diâmetros ou volumes de células especificados. 19 linhagens celulares diferentes foram preparadas para contagem e as concentrações iniciais teóricas foram determinadas usando o contador Aculter.

Essas suspensões celulares foram então diluídas para obter suspensões celulares em concentrações celulares teóricas. O contador de células do cetro foi então usado para determinar as concentrações celulares. Esta figura mostra cinco diluições que foram medidas para cinco linhagens celulares representativas, juntamente com a concentração teórica de células.

O alto grau de linearidade, conforme indicado pelos valores de r-quadrado, demonstra que a contagem de cetros é um método confiável para as linhagens celulares testadas em uma ampla faixa de operação linear. A precisão relativa geral da contagem de cetros é demonstrada aqui, na qual os dados obtidos da contagem de cetros são comparados com as contagens obtidas da contagem de cetro. O log da contagem de células do cetro é plotado em relação ao log da contagem de coter e mostra que, em todas as linhagens celulares testadas, as contagens de cetro correspondem às contagens de coter.

Contagens de 19 linhagens celulares foram realizadas usando um contador Z de duas relhas. O contador de células do cetro, um contador automatizado baseado em visão, como célula V ou sistema de teste de contagem, e uma contagem de hemo TER foram realizados de acordo com as instruções do fabricante usando a mesma suspensão inicial da célula e diluições idênticas. Os resultados mostrados nesta figura demonstram que as concentrações celulares medidas pela contagem de cetros correspondem de perto às concentrações celulares teóricas com alta linearidade.

O coeficiente percentual de variação ou CV foi calculado para cada diluição de cada linhagem celular. Para cada sistema de contagem mostrado aqui está a porcentagem média de CVS em 19 linhagens celulares em relação à concentração de células e método de contagem dentro da faixa de operação. O contador de células do cetro é mais preciso do que a contagem de hemocitômetros, exibindo desvios padrão menores e coeficientes de variação médios menores.

A contagem de cetros é 10 vezes mais rápida que a hemocitometria e mais rápida que outros contadores automatizados também. Aqui, as células SF nove, MCF sete e HC 2 93 foram contadas usando os métodos descritos neste vídeo. O tempo médio necessário para medir a concentração celular foi registrado.

Observe que a hemocitometria foi realizada apenas uma vez por amostra. O Scepter faz medições com base no tamanho da célula. Assim, quaisquer alterações na morfologia celular podem ser capturadas no histograma.

Culturas saudáveis exibem uma boa distribuição gaussiana em forma de sino, enquanto as células não saudáveis piolhos e causam uma mudança no histograma para a esquerda. Da mesma forma, quando uma população de 50% de células mortas foi misturada com 50% de células vivas, também foram observadas mudanças no histograma. Acabei de mostrar como usar o novo contador de células de cetro para millipore, que está revolucionando a maneira como os pesquisadores contam suas células.