Protocolo para a Criação Mosquito (A. gambiae)

Meu nome é Shish e sou pós-doutorando no laboratório do Dr. George OU na Escola de Saúde Pública de Johns Hopkins. No Departamento de Microbiologia Molecular e Imunologia, mostrarei como criar mosquitos da espécie *Gambusia*. No laboratório, mantemo-los em uma sala de insetos, que normalmente é conservada a 27 graus centígrados e 80% de umidade.

O insetário também é mantido em um ciclo de 12 horas de dia e noite, de modo que possamos imitar as condições encontradas em ambientes naturais. Este é o insetário que temos, uma instalação central aqui, responsável por manter esses insetos. Como é possível observar, há várias bandejas contendo mosquitos em estágios diferentes, como o ovo, as diversas fases das larvas e a pupa.

Essas bandejas contêm larvas com cerca de 11 ou 12 dias de idade, e esta é uma gaiola onde coletamos os mosquitos adultos e os mantemos em solução de sacarose a 10%. Para iniciar o processo de criação dos mosquitos, precisamos alimentá-los com sangue, pois os mosquitos necessitam da proteína do sangue para pôr ovos. Assim, o dia um ocorre após os adultos serem coletados na gaiola e mantidos em sacarose a 10%.

No dia um, deve-se alimentar os mosquitos com sangue, e é por isso que se utiliza a alimentação com sangue por membrana artificial. Este é um alimentador de vidro, que usamos para a alimentação por membrana dos mosquitos. Colocamos o sangue no interior através do pequeno orifício que você vê, e ele é mantido dentro dele.

Na parte inferior do lado, há dois bicos, que são conectados a um banho de água mantido a 37 graus. Para manter o sangue aquecido a 37 graus e preparar o alimentador para a alimentação, pegamos um pequeno pedaço de parileno. Esticamos pelas duas extremidades e por todos os quatro lados, e então colocamos isso no lado aberto do alimentador de vidro, de modo a formar uma fina camada de membrana, semelhante à pele.

Isso é o que se chama alimentação por membrana. Este é um banho de água circulante, que mantém a água a 37 °C e também faz circular a água através do alimentador de vidro, de modo que o sangue permaneça aquecido a 37 °C. Assim, conectamos o alimentador de vidro através de pequenos capilares e ligamos ao banho de água circulante, ligando em seguida o banho para que a água circule; a água e o sangue nunca se misturam, pois estão em câmaras separadas.

Esta é uma gaiola de mosquitos adultos de Phis Gambi. Este é o alimentador de vidro, que está sendo conectado ao banho circulante, e colocamos uma pinça na parte superior da gaiola e adicionamos 200 microlitros de sangue. A gaiola contém mosquitos machos e fêmeas.

É apenas a fêmea que se alimenta de sangue. A alimentação dura cerca de 30 minutos. Dois dias após a alimentação com sangue, colocamos copos para ovos dentro da gaiola dos mosquitos para que eles depositem os ovos.

É assim que se faz. Pegamos um béquer pequeno e o preenchemos parcialmente com água destilada, pegamos um papel e o preenchemos, depois o enrolamos em formato cônico e o colocamos no béquer contendo a água destilada, certificando-nos de que o pimentão receba umidade. Agora, abrimos lentamente o cercado de mosquitos tomando cuidado para não permitir que nenhum mosquito saia, e colocamos os copos com ovos no interior.

No dia seguinte após os copos serem colocados dentro da gaiola, ou seja, no quarto dia, eles são retirados lentamente da gaiola. E estes são os ovos, os escuros, que também contêm alguns mosquitos mortos. Assim que tiver os ovos prontos, coloque-os em uma bandeja de plástico.

No passado, a bandeja de plástico é preenchida com água destilada. Pegue o filtro com os ovos e coloque-os para fora. Também adicionamos uma pitada de alimento A, que é o alimento moído para peixes, e colocamos a bandeja na prateleira.

Devemos nivelar a bandeja no dia em que iniciamos a montagem da bandeja e também identificar quais espécies estão aqui. Isso é após você, ou seja, no dia seguinte após colocar o ovo na bandeja. Ou seja, estes têm um dia de vida, mas o protocolo real é o quinto dia do dia do mosquito.

Estes pretos são os ovos, que estão prestes a eclodir em larvas. E esta é a ração para mosquitos. Para a criação de mosquitos, geralmente utilizamos três tipos diferentes de alimentos.

O alimento A é na verdade alimento para peixes moído, e é isso que adicionamos quando iniciamos o cultivo de mosquitos, na fase X, adicionando diariamente dois comprimidos do alimento C, que é ração para gatos adquirida da Purina. Após oito ou nove dias, trocamos a água da bandeja e acrescentamos água fresca. Nesse momento, em vez do alimento A, adicionamos uma pitada do alimento B, que nada mais é do que o alimento moído, C, ou seja, ração para gatos moída, além de dois comprimidos do alimento C; os ovos eclodem em larvas.

E existem três estágios diferentes das larvas. Primeiro no instalado, segundo no instalado e terceiro no instalado. Estas são bandejas que contêm as larvas, com idade de cinco ou seis dias.

Estas Ravi, que estão em um estágio muito mais avançado, com cerca de nove a 10 dias de idade. Nesse período, a água foi trocada e foi adicionada água fresca e alimento novo. Esta bandeja contém tanto os adultos quanto os ppe.

Estes são os adultos, como você pode ver, voando sob as mosquiteiras. E na borda, você pode ver todos os PPE de cor escura, que irão eclodir para os adultos. Uma vez que você tenha os adultos, eles estarão prontos para serem coletados em uma gaiola, que tem esta aparência.

Tem um forro de papel-toalha no interior e um pequeno frasco contendo uma solução super a 10% e um pedaço de algodão em seu interior, que servirá como fonte alimentar para os mosquitos. Então, cobrimos a tampa, e este é o aparelho, o aspirador, que é conectado ao vácuo, por meio do qual coletaremos os adultos dessas bandejas. Esta parte do aspirador é conectada aqui e está na outra extremidade.

Conectado à vácuo. Colocamos a gaiola dentro, na qual coletaremos os adultos nesta caixa pequena. Esta é outra parte do aspirador, que possui um tubo longo, que será colocado dentro da bandeja de mosquitos.

O outro lado será conectado à gaiola. Você precisa garantir que tudo esteja bem apertado, para que o vácuo funcione corretamente. Fechamos a tampa e verificamos se tudo está bem vedado.

Inicie lentamente o equipamento traseiro. Assim que a configuração estiver pronta, colocamos lentamente este tubo longo dentro da bandeja de mosquitos, certificando-nos de fechar a tela para não permitir que os mosquitos escapem. E, como é possível observar, os mosquitos estão sendo coletados na pequena gaiola.

Leve o tubo por toda parte lentamente para coletar todos os adultos. Agora estou quase terminando. Todos os adultos foram coletados e estão todos nesta gaiola, que você pode ver.

Em seguida, lentamente, liberamos o vácuo e desmontamos o aparelho de coleta. Então, estas são as mosquitos adultos de Ana Gambi, que permanecerão nesta gaiola por alguns dias. Serão alimentados com sacarose a 10%, e receberão sangue para se alimentarem somente quando precisarmos que ponham ovos.

Acabo de mostrar como usar os mosquitos. Após finalizar os mosquitos em condições de laboratório, os passos importantes por escrito são a alimentação com sangue. Em seguida, colocar os copos de ovos, acompanhar os ovos e, então, eles passam por diferentes estágios, como larvas, pupas e adultos.

E, finalmente, coletamos os adultos. A importância dessa técnica é que precisamos imitar as condições existentes no ambiente natural externo para obtermos mosquitos saudáveis, e então infectá-los com o plasmódio e realizar diferentes tipos de estudos sobre a malária, cujo objetivo principal é erradicar a malária do mundo.