Name: שמירה ב Wolbachia בינוני סלולרי חינם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: למד שיטה לטיהור Wolbachia pipientis מתאי Anopheles gambiae וגידול החיידק בתרחיף נטול תאים. הפרוטוקול כולל שבירת ממברנות בתהליך ליזה בחלוקי זכוכית, סרכוז דיפרנציאלי וסינון להפרדת החיידקים משיירי התאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.

שמירה ב wolbachia בינוני סלולרי חינם

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

בפרוטוקול זה וידאו, נהלים הם הפגינו (1) לטהר symbionts Wolbachia מתוך תאים בתרבית יתושים, (2) להשתמש assay ניאון כדי לברר את הכדאיות של Wolbachia מטוהרים (3) לשמור על Wolbachia תאיים כעת בינוני התא ללא . מטוהרים Wolbachia להישאר בחיים בשלב תאיים, אבל לא עד לשכפל מחדש מחוסן לתוך התאים האיקריוטים. Wolbachia תאיים מטוהרים בצורה זו תישאר בת קיימא במשך שבוע לפחות בטמפרטורת החדר, ואולי יותר. מטוהרים Wolbachia מתאימים מיקרו הזרקה, מיצוי DNA ויישומים אחרים.

וידאו זה מתאר שיטה לטיהור Wolbachia pipientis מקו תא אנופלס gambiae ואז culturing endosymbiont במדיום הסלולרי חינם. Assay עבור הכדאיות של החיידק הוא הוכיח.

שמירה ב Wolbachia בינוני סלולרי חינם

בפרוטוקול וידאו זה, מודגמים הליכים ל-(1) ניקוי סימביונטים של Wolbachia מתאי יתושים בתרבית, (2) שימוש במבחן פלואורסצנציה כדי...

שמי קורטני סטון. אני עובדת בבית הספר לבריאות הציבור בלומברג של ג'ונס הופקינס במעבדתו של ד"ר ג'ייסון רסקון. היום נבצע טיהור חיידקים מתאי חרקים מתורבתים.זהו למעשה הליך פשוט מאוד. אנו מתחילים באיסוף התאים ולאחר מכן מבצעים פירוק פיזי של ממברנות התאי המארח האיקריוטי באמצעות ליזיס של חרוזי זכוכית. לאחר מכן, אנו משתמשים בצנטריפוגציה דיפרנציאלית כדי להפריד את החיידקים משאריות התאי המארח.לאחר מכן אנו משתמשים בסדרה של שלבי סינון כדי להסיר עוד יותר חלקיקי תאי מאכסן, כך שבסוף נותרים רק עם המשקע הבקטריאלי המטוהיר. זהו למעשה אחד הדרישות המרכזיות. זוהי תא מטורית לתרביות תאים, והיא משמשת לשמירה על סטריליות של כל התהליך, כיוון שתרביות תאים נדבקות לזיהומים בקלות רבה.אנחנו זקוקים גם למצע גידול תאים, לתאים עצמם, ואנו מגדלים אותם בבקבוקי פלסטיק. נזדקק גם לחרוזי טחינה של 3 mm, למבחנות קוניות של 50 ml, ולצנטריפוגה המסוגלת לבצע סבוב במהירות גבוהה, כ-18,000 G כדי לשקע את החיידקים שלנו, אך מסוגלת גם לבצע סבוב של כ-3,000 G או 2,500 G כדי לשקע את תאי המאכסן שלנו. לכן, הדבר הראשון שנעשה הוא להתחיל עם התאים שגידלנו.הם גדלו, נכון? אלו בקבוקי T 75. יש בהם 15 mls של מצע תרבית וגם אותנו.הדבר הראשון שנעשה הוא להתחיל בפירוק שכבת התאים ואיסופם לשפופרת צנטריפוגה של 50 ml. יש פשוט להניע את השפוד למעלה ולמטה על שכבת התאי

maintaining-wolbachia-in-cell-free-medium

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית

כמותיים אוטומטי תפוקה גבוהה הגנום כולו RNAi המסכים ג elegans</em

בידוד ערפדים של נוזלים מתאיים<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

סרטון זה מציג שיטה לבידוד ותרבית סטרילית של תאי C. elegans עובריים  במבחנה.

עיכול אנזימטי ודיסוציאציה ידנית: שיטה להכנת עוברים מסוג C. elegans לתרבית תאים

סי אלגנס בדרך כלל הוא גדל על צלחות אגר מוצקות או נוזליים בתרבויות זרע עם א ' coli. כדי למנוע תוצרי לוואי חיידקים מבלבול מחקרי טוקסיקולוגי ותזונתיים, אנו מנוצלים מדיום נוזלי axenic, CeHR, לגדול ולסנכרן מספר רב של תולעים עבור מגוון רחב של יישומים במורד הזרם.

Culturing Elegans Caenorhabditis בAxenic נוזלית מדיה ובריאה של תולעים מהונדסים ידי microparticle הפצצה

Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia שוחררו לאוכלוסיות טבעי לדכא את השידור של arboviruses. אנו מתארים שיטות האחורי Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia במעבדה ניסויים ולשחרר שדה, נקיטת אמצעי זהירות כדי למזער את עיבוד מעבדה ובחירה.

שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia

פרוטוקול זה מתאר כיצד להקים זיהום ויראלי ויוו דרוזופילה melanogaster באמצעות שיטת ננו-הזרקת טכניקות בסיסיות כדי לנתח וירוס-פונדקאי אינטראקציה.

הקמתה של זיהום נגיפי וניתוח של התערבות מארח-וירוס דרוזופילה Melanogaster

ארבע שיטות שימשו לאיתור וולבצ'יה תוך-תאית, אשר השלימו זו את זו ושיפרו את דיוק הזיהוי של זיהום וולבצ'יה של Aa23 שמקורו ב-Aedes albopictus ו-Aa23-T שנרפאו מזיהום וולבצ'יה מקומי באמצעות אנטיביוטיקה.

זיהוי זן וולבצ'יה wAlbB ב Aedes albopictus קווי תאים

מוצג כאן פרוטוקול אופטימלי לגידול נמטודות בודדות מבודדות על מדיה מוצקה בהתקנים מרובי בארות מיקרו-מפוברקים. גישה זו מאפשרת לעקוב אחר בעלי חיים בודדים לאורך חייהם עבור מגוון פנוטיפים הקשורים להזדקנות ולבריאות, כולל פעילות, גודל וצורת גוף, גיאומטריה של תנועה והישרדות.

תרבית ארוכת טווח וניטור של Caenorhabditis elegans מבודדים על מדיה מוצקה במכשירים מרובי בארות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לתרבית נמטודות בודדות על מדיה מוצקה למעקב אחר פרמטרים פיזיולוגיים לכל החיים וכימות פלואורסצנטי. מערכת תרבית זו כוללת מחסום חומצה פלמיטית סביב בארות תולעים בודדות כדי למנוע מבעלי חיים לברוח, ומאפשרת שימוש בהתערבויות מרתיעות, כולל חיידקים פתוגניים וגורמי עקה כימיים.

תרבות ארוכת טווח של Caenorhabditis elegans בודדים על מדיה מוצקה לניטור פלואורסצנטי אורכי והתערבויות מרתיעות

קווי תאים שימושיים במחקרים על אורגניזמים תוך-תאיים שלא ניתן לגדל מחוץ לתאים המארחים שלהם. למרות שקווים נגועים בוולבכיה אפשרו תגליות רבות, ההטרוגניות בתוך קווים אלה יכולה להוביל לתוצאות ניסוי משתנות. אנו מציגים פרוטוקול ליצירת שיבוטים של תאים בודדים ותרביות רציפות מתאי JW18 נגועים בוולבכיה.

יצירת תרביות חד-שבטיות מקו התאים של Drosophila melanogaster JW18 נגוע בוולבכיה

למד שיטה לטיהור Wolbachia pipientis מתאי Anopheles gambiae וגידול החיידק בתרחיף נטול תאים. הפרוטוקול כולל שבירת ממברנות בתהליך ליזה בחלוקי זכוכית, סרכוז דיפרנציאלי וסינון להפרדת החיידקים משיירי התאים.

שמירה ב Wolbachia בינוני סלולרי חינם

גלה סרטונים נוספים