Name: Farmacologia Comportamental no condicionamento clássico da Resposta Extensão Proboscis em Abelhas ( Apis mellifera) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-24T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 36 s
Description: Aprenda farmacologia comportamental em abelhas Apis mellifera usando condicionamento clássico da resposta de extensão da probóscide. Este método permite investigar mecanismos moleculares da formação da memória.

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Este trabalho foi financiado por uma doação do Ministério Federal Alemão de Educação e Pesquisa (BMBF) dentro do foco Bernstein: base neuronal da Aprendizagem (BFNL) para DE Agradecemos Randolf Menzel de valiosos comentários sobre uma versão anterior do manuscrito.

1. Abelhas captura da Hive <ol><li> Um dia antes do experimento começa, entre 2 e 4 horas, deixando as abelhas da colméia são capturados. Para isso, uma pirâmide de luz UV plexiglass-permeável (altura = 30 cm, ápice de 3,5 x 3, 5 cm, base 18 x 18 cm), o que é que pode ser fechado no ápice e na base, é realizada em um 20 - 30 cm de distância na frente da entrada colmeia com a base aberta e fechada para o ápice que as abelhas saindo da colméia entrar na base da pirâmide. A base é fechada e as abelhas capturados são levados para o laboratório para manuseio. </li></ol> 2. Transferência Bees da pirâmide em frascos de vidro <ol><li> No laboratório, a pirâmide é colocado sobre sua base. As paredes da pirâmide estão escurecidos (por exemplo, com uma toalha), mas o ápice fica descoberto. Por causa de sua fototaxia positiva, as abelhas deixarão a pirâmide por meio do ápice quando aberto. Uma por uma, as abelhas são transferidas da pirâmide em frascos de vidro, mantendo os frascos sobre o ápice aberto. Um frasco é usado por abelha. Portanto, o ápice é fechado quando uma abelha entra no frasco. </li></ol> 3. Abelhas mobilização Tubes <ol><li> As abelhas são imobilizadas por refrigeração-los na frascos de vidro em gelo por 2,5-3,5 min. Aconselha-se a assistir a abelha e removê-lo do gelo, assim que pára de se mover. </li><li> A única abelha imobilizado é aproveitada em um pequeno tubo de plástico com fita adesiva, de modo que é capaz de se mover livremente sua tromba, mas não a sua cabeça, tórax e pernas. É importante que o pescoço não é comprimido. </li><li> Cada abelha fixo em um tubo de plástico é colocado em um furo numeradas em um rack para melhor manuseio e identificação. Depois de ter sido removido para a recuperação de condicionamento ou de memória do tubo é sempre retornado ao poço exatamente o mesmo. </li></ol> 4. Abelhas alimentação <ol><li> Na primeira noite (06/04 horas), depois de ser pego, as abelhas são alimentadas até a saciedade com solução de sacarose (0,88 M, o açúcar branco refinado doméstico dissolvido em água da torneira). Para alimentar uma abelha, seu PER é eliciada tocando suas antenas com a solução de sacarose e que o animal é permitido consumir uma gota (4 mL) da solução de sacarose. As abelhas são alimentadas uma após a outra repetidamente até que eles já não apresentam um PER rápido e confiável quando suas antenas são tocados com solução de sacarose. </li><li> Em cada noite subseqüente (4-6 pm) das abelhas são alimentadas experimento uma após a outra quatro vezes com uma gota de solução de sacarose (4 mL, 0,88 M, açúcar branco refinado resolvido em água da torneira). É importante que a solução de sacarose não é espalhado em antenas da abelha ou da tromba durante a alimentação e que os tubos não estão contaminados com solução de sacarose. As abelhas não devem ser alimentados em ou perto do local condicionado para excluir a possibilidade de associar o contexto de formação com o estímulo de sacarose. </li></ol> 5. Mantendo abelhas Harnessed Overnight <ol><li> Abelhas são mantidas durante a noite em uma bacia de plástico em temperatura ambiente. Água da torneira é cheia na bacia (cerca de 0,5-1 cm de altura). Racks com as abelhas são colocadas aproveitado na bacia acima da linha d'água usando placas de ELISA como uma plataforma. Finalmente, a bacia é coberta com papelão. </li></ol> 6. Condicionado olfativa Na primeira manhã (10:00) do experimento de condicionamento olfativo é realizada. O estímulo condicionado (CS) é um odor, o estímulo não condicionado (EUA) é solução de sacarose. <ol><li> 4 mL do odor (óleo de cravo, por exemplo) são pipetados em um papel filtro rodada (1,3 cm de diâmetro) que é então inserido em uma seringa de 20 mL. O odor é pipetado sob um capuz e dicas de filtro são usados ​​para evitar a contaminação da pipeta. </li><li> O rack com abelhas aproveitado é colocado próximo ao local 30 min condicionado antes do procedimento de condicionamento começa, mas a uma distância para o lugar na frente de um tubo de escape onde as abelhas só são condicionadas. </li><li> Condicionamento consiste em três pares de odor (o estímulo condicionado, CS) e solução de sacarose (o estímulo incondicionado, EUA, 1,25 M) com um intervalo inter-ensaio (ITI), de 10 min. Um sinal acústico entregue ao pesquisador através de um leitor de áudio garante a data precisa de início do estímulo, estímulo offset, duração do estímulo e colocando. Um ensaio de aquisição começa com uma colocação de 10 segundos do animal na frente de um escape. Pouco antes do final do sec 10 a seringa contendo o odor é colocado 3 centímetros na frente da abelha orientadas para antenas da abelha. Posteriormente, o odor é apresentado durante 5 segundos, empurrando 20 mL de ar através da seringa. Após os primeiros 3 segundos do flagelos distal de ambas as antenas são tocados com uma solução de sacarose-umedecidos palito e animais estão autorizados a lamber o palito moistend por 4 seg. 13 seg após o término da estimulação CS, as abelhas são tomadas fora do contexto de formação e colocado de volta na prateleira. No total, um ensaio de treinamento dura 28 seg. É importante que nem antenas da abelha nem a tromba são cobertos com sacarose, após condicionamento. Por isso, tem que ser assegurado que o palito é apenas umedecido com solução de sacarose e que nenhuma gota de forma sacarose solução no palito. </li><li> Após o condicionamento dos racks são colocados de volta na tigela. </li><li> Comportamento dos animais durante o experimento, ou seja, a ocorrência do PER durante a colocação e CS e apresentação dos EUA, é monitorado e anotadas pelo experimentador. </li></ol> 7. Retenção de memória <ol><li> Testes de retenção pode ser realizada em qualquer intervalo de tempo (min até dias). O rack com abelhas é colocado perto do local condicionado min 30 antes do teste de memória começa. </li><li> Um teste de memória consiste em 5 segundos sem apresentação CS apresentação EUA. O teste começa com uma colocação de 10 segundos do animal na frente dos gases de escape. Posteriormente, o odor é apresentado durante 5 segundos, como descrito acima. O comportamento do animal, ou seja, a ocorrência do PER durante a colocação ea apresentação CS é anotado durante o experimento. </li><li> No final do experimento a resposta extention proboscis é novamente provocado tocando as antenas com solução de sacarose para garantir que o animal ainda é capaz de estender a sua tromba. </li></ol> 8. Injeção sistêmica O ponto de tempo de injeção sistêmica depende do delineamento experimental. <ol><li> Um pequeno buraco é feito na cutícula da parte posterior da rótula próxima à fissura scutal acima dos 17 músculos de vôo usando uma agulha hipodérmica descartável (21 G). </li><li> Usando um tubo de vidro capilar, uma solução mL é injetado através do buraco na cutícula no músculo de vôo. Experimentadores treinados são capazes de injetar uma abelha cada 30 segundos, permitindo um calendário preciso de injeção e condicionamento. </li></ol> 9. Abelhas alimentação durante o Experimento <ol><li> Na noite (4-6 pm), após condicionamento, as abelhas são alimentadas uma após a outra quatro vezes com uma gota de solução de sacarose (4 mL, 0,88 M, o açúcar refinado branco dissolvido em água da torneira). É importante que a solução de sacarose não é espalhado em antenas da abelha ou da tromba durante a alimentação e que os tubos não estão contaminados com solução de sacarose. As abelhas não devem ser alimentados em ou perto do local condicionado para excluir a possibilidade de associar o contexto de formação com o estímulo de sacarose. </li></ol> 10. Coleta de Dados e Análise de Dados <ol><li> Ocorrência da resposta de extensão tromba durante o experimento é monitorado. A abelha é marcado positivo se estende a sua tromba entre o início do CS ea apresentação de os EUA (durante o treinamento) ou durante a apresentação CS (durante a fase de teste), cruzando uma linha virtual entre as mandíbulas abertas. </li><li> Para ser incluído na análise de animais deve cumprir dois critérios: devem sobreviver todo o experimento e eles devem mostrar a resposta de extensão incondicionada probóscide (PER) para solução de sacarose no final do experimento. A porcentagem de abelhas mostrando o PER durante a aquisição e testes de retenção é plotado para cada apresentação CS. </li></ol> 11. Resultados representativos: Dois experimentos são apresentados aqui. No primeiro experimento olhamos para o impacto da injeção sistêmica de tampão fosfato (PBS, em mM: NaCl 137, KCl 2,7, 10,1 Na 2 HPO 4, 1,8 KH 2 PO 4, pH 7, 2) na aprendizagem e no longo prazo a formação da memória. Três grupos de abelhas foram treinados com três CS-US pares, com um intervalo inter-teste de 10 min: um grupo não-tratado, um grupo que foi injetado com 1 mL PBS 30 min antes do treino, e um grupo sham-injetado tratados da mesma forma que o grupo PBS-injetada, mas sem injetar PBS. 24 h após a formação da memória foi testada com uma apresentação CS em todos os três grupos. A percentagem de animais que apresentem a resposta condicionada durante o condicionamento aumenta significativamente ao longo dos três ensaios de formação (Fig.1, ANOVA para medidas repetidas para o fator tempo F 2378 = 340,456, p &lt;0,05). Nenhuma diferença no PER pode ser observada entre os três grupos durante o condicionamento (ANOVA para medidas repetidas para o fator de grupos F2, 189 = 1,299, p&gt; 0,05). Isso vale para um teste de retenção de 24 h (F2, 187 = 0,752, p&gt; 0,05) na comparação entre animais não tratados com PBS-injetado animais e sham-injetado. No segundo experimento, demonstramos a inibição da retenção da memória de três e quatro dias depois do treinamento quando o inibidor da síntese protéica anisomicina (10 mM) foi injetado sistemicamente 30 min depois de três CS-US emparelhamentos. Comparação de um grupo anisomicina-injetados com um grupo PBS-injetado revela uma diferença significativa entre os grupos durante a retenção de test (Fig.2, ANOVA para medidas repetidas para o fator grupo F1, 94 = 8,86, p &lt;0,05). A grande diferença pode ser observada no teste de memória no dia 3 e dia 4. Isto assemelha-se os resultados de Wüstenberg et al. 18 anos, que também condicionada abelhas com três CS-US emparelhamentos, embora com um protocolo diferente. <img src="/files/ftp_upload/2282/2282fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Lesão cutícula ou injeção de PBS não altera aquisição e retenção da memória. Animais foram treinados com três CS-US pares (aquisição). Após 24 h, a memória foi testada (Retenção da Memória). Trinta minutos antes do treino, um buraco foi feito na cutícula dos dois grupos (lesão, PBS) e um desses grupos foram injetados com 1 mL de PBS (PBS). Um terceiro grupo foi deixada intacta (sem tratamento). Apresentada é a percentagem de animais para cada grupo responder a apresentação com um odor PER. Uma ANOVA não revelou diferenças significativas entre os grupos na fase de aquisição (F2, 189 = 1,299, p&gt; 0,05) ou na retenção da memória (F2, 187 = 0,752, p&gt; 0,05). <img src="/files/ftp_upload/2282/2282fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Injeção de anisomicina 40 min após o emparelhamento CS-US última reduz a retenção de memória de três dias e quatro dias depois do treinamento. Animais foram treinados com três CS-US pares (aquisição) e injetados com 1 mL 10 mM anisomicina (Aniso) ou 1 mL de PBS 1 h após o julgamento primeira formação. Memória foi testada (Retenção da Memória) 24 h, 48 h, 72 he 96 h depois. Apresentada é a porcentagem de animais por grupo respondendo a apresentação com um odor PER. A injeção de anisomicina leva a uma redução significativa de memória de retenção de 72 h e 96 h após o treinamento (F1, 94 = 8,86, p &lt;0,05), como revelado por uma ANOVA.

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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

<ol><li> Captura das abelhas: Para coletar as abelhas obreiras experientes, as abelhas são capturados ou de manhã ou à tarde, evitando o tempo em que as abelhas jovens estão em vôos orientação 19. Forrageiras ou coletar pólen ou néctar. Diferenças entre o pólen e néctar forrageiras têm sido observadas de acordo com sua capacidade de resposta de açúcar e suas habilidades de aprendizagem 20. A fim de pegar forrageiras néctar apenas, uma fonte de alimento artificial preenchido com uma solução de sacarose pode ser instalado próximo à colméia e os animais podem ser recolhidos lá. Forrageiras pólen retornando à colméia pode ser identificado pelo cestas de pólen nas patas traseiras 20. </li><li> Fixação e manipulação: Extended refrigeração de abelhas no gelo deve ser evitado, pois pode afetar sua capacidade de aprender e sobreviver até o final do experimento. Tarsi tem que ser fixado cuidadosamente dentro do tubo para evitar a estimulação acidental com solução de sacarose. Isto é importante, porque as abelhas têm sido mostrados para aprender pela estimulação do tarso com succrose solução 3,21. </li><li> Condicionamento olfativo: O número de tentativas de condicionamento, o intervalo inter-julgamento, eo ponto de tempo de teste pode ser variado, dependendo do foco do estudo 3,22. </li><li> Alimentação: O nível de saciedade de abelhas é conhecido por afetar seu desempenho de aprendizagem e retenção de memória 3,23. Isso tem de ser tida em conta no planejamento de experimentos. </li><li> Injecção: sacos de ar estão localizados nos 17 tórax de abelhas. Estas partes vitais do sistema respiratório são necessários para a sobrevivência. Assim, cuidados devem ser tomados para não danificar os sacos de ar durante a injeção. A liberação de bolhas de ar indica danos ao sacos aéreos. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Seringa Omnifix 20 ml</td><td>B. Braun Medical</td><td>4616200 V</td><td></td></tr><tr><td>Açúcar doméstico refinado branco</td><td>Kaisers Supermarket, Berlim, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Óleo de cravo</td><td>Bombastus, Freital, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multipette plus</td><td>Eppendorf</td><td>4981 000.019</td><td></td></tr><tr><td>Porta-tubos para 30 tubos de abelhas</td><td>Caseiro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubos de plástico</td><td>Caseiro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pirâmide de plexiglass permeável à luz UV</td><td>Caseiro</td><td></td><td>altura = 30 cm, vértice 3,5 x 3,5 cm, base 18 x 18 cm</td></tr><tr><td>Fita adesiva</td><td>Tesa, Hamburgo, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Palitos capilares 1-5&amp;mu;l</td><td>Selzer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pontas capilares 1-5&amp;mu;l</td><td>Selzer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Papel filtro com espessura de 0,16-0,2 mm</td><td>Macherey-Nagel</td><td>MN 616 ou MN615</td><td>Ajustado em círculos com diâmetro de 1,3 cm</td></tr><tr><td>Agulha hipodérmica descartável</td><td>B. Braun Medical</td><td>4657683</td><td>diâmetro de 0,45 mm</td></tr></tbody></table>

farmacologia comportamental no condicionamento clássico da resposta extensão proboscis em abelhas ( apis mellifera)

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees (Apis mellifera)

Abelhas (Apis mellifera) são bem conhecidos por suas habilidades de comunicação e orientação e para os seus 1,2 impressionante capacidade de aprendizagem. Porque a sobrevivência de uma colônia de abelhas depende da exploração de fontes de alimentos, as abelhas forrageiras aprender e memorizar os sites flor variável, bem como a sua rentabilidade. Abelhas forrageiras podem ser facilmente treinados em ambientes naturais onde forragem em um local de alimentação e aprender os sinais relacionados, tais como odor ou cor. Aprendizagem associativa apetitivo também pode ser estudado sob condições controladas em laboratório pelo condicionamento da resposta de extensão probóscide (PER) de abelhas individualmente aproveitado 3,4. Este paradigma de aprendizagem permite o estudo dos mecanismos neuronais e moleculares subjacentes à aprendizagem e formação da memória de uma forma simples e altamente confiável 5-12. Uma abordagem a farmacologia comportamental é usado para estudar os mecanismos moleculares. Medicamentos são injetados sistemicamente a interferir com a função de moléculas específicas durante ou depois da aprendizagem e formação da memória 13-16. Aqui demonstramos como treinar abelhas aproveitado no condicionamento PER e como aplicá-drogas sistemicamente por injecção no músculo de vôo de abelhas.

Demonstramos como implementar um método de farmacologia comportamental em um paradigma de condicionamento apetitivo olfativa de abelhas (Apis mellifera) por aplicação sistêmica de medicamentos. Este método permite investigação dos mecanismos subjacentes à aprendizagem e formação da memória de uma forma simples e confiável.

Farmacologia Comportamental no condicionamento clássico da Resposta Extensão Proboscis em Abelhas ( Apis mellifera)

As abelhas melíferas (Apis mellifera) são bem conhecidas por suas habilidades de comunicação e orientação e por sua impressionante capacidade de aprendizagem1,2. Devido ao ...

O objetivo geral deste procedimento é estudar os mecanismos moleculares subjacentes à aprendizagem e à formação da memória. Em abelhas melíferas, o primeiro passo é coletar abelhas em voo livre a partir de suas colmeias. Em seguida, as abelhas são fixadas em tubos de plástico.O terceiro passo do procedimento é realizar o condicionamento clássico. Drogas podem ser injetadas em determinados momentos ao redor do condicionamento para estudar seus efeitos na formação de aprendizado e memória. O passo final do procedimento é testar a retenção da memória.No fim das contas, alterações no comportamento após tratamento com medicamentos podem revelar os mecanismos moleculares subjacentes à formação da aprendizagem e da memória. Em abelhas. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área do aprendizado e da memória ao revelar os mecanismos moleculares da formação da memória.Em geral, pesquisadores novos neste método terão dificuldades porque o momento da apresentação dos estímulos durante o condicionamento e a recuperação da memória deve ser exato. Além disso, o regime alimentar é crítico. O procedimento será demonstrado por Cutting Gearing e Johannes Faberg a estudantes de pós-graduação do meu laboratório. No dia anterior ao experimento, colete abelhas entre as 14h e 16h usando uma pirâmide de plexiglás permeável à luz ultravioleta.De volta ao laboratório, coloque a pirâmide sobre sua base e escureça as paredes com uma toalha, deixando o ápice descoberto. Abra o ápice e segure um frasco de vidro sobre a abertura, permitindo que uma única abelha entre no frasco antes de fechá-lo novamente. Continue este procedimento até que todas as abelhas tenham sido transferidas para um frasco de vidro no outono e no inverno.Quando as abelhas não estão voando no exterior, uma colmeia é mantida dentro de uma estufa em uma rede; abelhas individuais são capturadas diretamente da rede. Usando um frasco de vidro por abelha, imobilize a abelha resfriando o frasco em gelo por dois minutos e meio a três minutos e meio. Observe a abelha cuidadosamente e remova-a do gelo assim que parar de se mover.Imobilize a abelha em um pequeno tubo de plástico usando fita adesiva. Certifique-se de que a abelha consiga mover livremente suas antenas, mas não sua cabeça, tórax ou pernas. Também é importante não comprimir o pescoço.Uma vez que uma abelha esteja preparada, coloque o tubo em um orifício numerado no suporte, para melhor manipulação e identificação.Os tubos são sempre devolvidos ao mesmo furo. Após o manuseio, alimente as abelhas entre as 16 e as 18 horas em um local distinto do local de condicionamento. Elicite a resposta de extensão da probóscide ou PER ao tocar as abelhas e suas antenas.Com uma solução de sacarose, permita que a abelha consuma uma gota de cerca de quatro microlitros da solução de SRAs. Certifique-se de não manchar as antenas da abelha, o pro bóis ou o tubo de plástico. Alimente cada abelha até que ela não mais o faça.Mostre uma PER rápida e confiável quando as antenas entrarem em contato com a solução. Nas noites subsequentes do experimento, alimente cada abelha quatro vezes com uma gota de solução de sacarose. Encha uma tigela de plástico com água da torneira até uma altura aproximada de 0,5 a um centímetro.Coloque a bandeja com as abelhas presas na tigela usando placas lisas como plataforma. Cubra a tigela com papelão e armazene em temperatura ambiente durante a noite. As abelhas passam por condicionamento olfativo por volta das 10:00 da manhã no dia seguinte à coleta.30 minutos antes do início do experimento. Coloque a bandeja com as abelhas presas perto do local de condicionamento, mas longe da abertura do tubo de exaustão onde as abelhas serão treinadas. Em seguida, prepare o estímulo condicionado trabalhando em uma cabine de segurança.Use uma pipeta com ponteira de filtro para transferir quatro microlitros de óleo de cravo para um papel de filtro redondo. Coloque o papel de filtro perfumado em uma seringa de 20 mililitros e insira o êmbolo. Configure o aparelho de áudio que emitirá um sinal acústico para o experimentador.Isso garante o tempo exato do estímulo, início do estímulo, término do estímulo, duração e posicionamento. Prepare-se para registrar o comportamento da abelha durante todo o condicionamento. Uma pontuação positiva é atribuída se a abelha estender seu SSIS entre o início do estímulo condicionado e a apresentação do estímulo incondicionado.Atravessar uma linha virtual entre as mandíbulas abertas Para iniciar um ensaio de aquisição, selecione a abelha a ser treinada e posicione-a em frente ao exaustor por 10 segundos. Pouco antes do final deste intervalo de dez segundos, coloque a seringa contendo o odor a três centímetros das abelhas e antenas. Apresente o odor durante cinco segundos empurrando 20 mililitros de ar através da seringa.Após três segundos, introduza o estímulo incondicionado tocando a parte ventral da região distal das cerdas de ambas as antenas com uma solução de sacarose, usando um palito úmido. Tendo o cuidado de não depositar a solução sobre as abelhas e as antenas, permite-se então que a abelha lamba o palito. Esse estímulo composto dura quatro segundos, após os quais as abelhas são removidas do contexto de treinamento e devolvidas à prateleira.13 segundos após a apresentação do estímulo condicionado, um ensaio de treinamento dura 28 segundos. Retorne a abelha ao local de treinamento após um intervalo interensaio de 10 minutos. Realize o segundo dos três ensaios conforme mostrado anteriormente e aguarde mais 10 minutos antes de realizar o último emparelhamento.Após a conclusão do treinamento diário, coloque as grades novamente na tigela. Lembre-se de alimentar cada abelha quatro vezes com uma gota de quatro microlitros de solução de sacarose entre 16h e 18h. Como demonstrado anteriormente, testes de retenção podem ser realizados em intervalos que variam de minutos a dias após o treinamento. Prepare-se para o teste de memória colocando a grade de abelhas próximo ao local de condicionamento por 30 minutos.Inicie o teste colocando uma abelha diante do escapamento por 10 segundos. Apresente o estímulo condicionado por cinco segundos e observe a ocorrência de uma REP. Após a conclusão dos testes do dia, devolva as grades de volta à tigela.Lembre-se de alimentar cada abelha quatro vezes com uma gota de quatro microlitros de solução de sacarose entre as 16h e as 18h, conforme demonstrado anteriormente. Ao final do experimento completo, verifique se a abelha ainda é capaz de estender o probóscide ao tocar as antenas com a solução de SRAs para que seja incluída na análise; as abelhas devem sobreviver a todo o experimento e apresentar um PER intacto. Em alguns estudos, injeções sistêmicas são utilizadas para investigar o efeito de intervenções farmacológicas na memória olfativa. Essas injeções podem ser administradas em diferentes momentos, dependendo do delineamento do experimento.Para começar, faça um pequeno orifício na cutícula da parte posterior do S scootin, próximo à fissura do S scootle acima do músculo voador, utilizando uma agulha hipodérmica descartável. Em seguida, encha um tubo capilar de vidro com um microlitro da solução a ser testada. Insira o capilar no orifício na cutícula e injete a solução no músculo voador.Experimentadores treinados são capazes de injetar uma abelha a cada 30 segundos, permitindo um cronometragem preciso da injeção e do condicionamento. Dois experimentos são apresentados aqui. O primeiro experimento examina o impacto de uma injeção sistêmica de soro fisiológico administrada antes do treinamento sobre a aprendizagem de uma memória.Existem três grupos neste estudo: um grupo que não recebe tratamento, um grupo que recebe uma injeção sistêmica de um microlitro de solução salina tamponada com fosfato ou um grupo simulado. Esses tratamentos foram administrados 30 minutos antes do treinamento, mostrado aqui à esquerda. A porcentagem de animais que exibiram a resposta condicionada durante a aquisição aumentou ao longo dos três ensaios de treinamento, sem diferenças entre os grupos.Os gráficos de barras à direita mostram que nem a injeção de PBS nem a lesão simulada afetaram a retenção da memória. Vinte e quatro horas após o treinamento, no segundo experimento, as injeções foram administradas 40 minutos após o treinamento, e as abelhas foram divididas em um grupo que recebeu solução salina e outro que recebeu um microlitro do inibidor da síntese de proteínas e eritromicina. Os gráficos de barras à direita mostram uma clara diminuição na retenção da memória em abelhas que receberam anisomicina. Esses resultados destacam a importância da síntese de proteínas na formação da memória olfativa.Após este procedimento, podem ser realizadas gravações eletrofisiológicas e eletrofisiológicas para responder perguntas adicionais, como qual é a base neurofisiológica da aprendizagem e da formação da memória após o seu desenvolvimento? Esta técnica abriu caminho para que pesquisadores na área de estudo da aprendizagem e da memória explorassem os mecanismos moleculares e neurofisiológicos envolvidos na formação da memória na abelha melífera.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

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Farmacologia Comportamental no condicionamento clássico da Resposta Extensão Proboscis em Abelhas ( Apis mellifera)

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