Colon ascendens Stent peritonite (CASP) - um modelo padronizado para sepse abdominal polimicrobianas
18 de dezembro de 2010
O Colon ascendens Stent peritonite (CASP) é um modelo altamente padronizado para sepse abdominal polimicrobianas em roedores. Este artigo descreve o procedimento cirúrgico de CASP. O modelo CASP e suas variantes permitem a investigação sistemática de vários problemas a respeito do assunto da sepse.
O objetivo geral deste procedimento é induzir sepse abdominal por meio da inserção de um stent no cólon ascendente de um camundongo. Isso é realizado primeiramente preparando o cólon ascendente. Em seguida, uma cânula adaptada é inserida no cólon e então fixada no lugar.
Por fim, o stent é removido e o cólon é recolocado na cavidade peritoneal. Em última análise, podem-se obter resultados que demonstram sepse por meio da medição de citocinas e contagens bacterianas no plasma. A principal vantagem dessa técnica em relação aos métodos existentes, como ligadura e punção, é que a sepse e a mortalidade podem ser tituladas conforme o tamanho do stent inserido.
Portanto, em geral, indivíduos que são novos neste método podem ter dificuldades, pois técnicas microcirúrgicas exigem alguma prática. Até que o desempenho perfeito possa ser alcançado, comece anestesiando o camundongo com uma injeção intraperitoneal de líquido narcótico e posicione o animal em posição supina. As patas do camundongo precisam ser fixadas com fita adesiva sobre a placa para garantir uma posição estável do animal durante a operação.
Para este procedimento, adapte uma cânula intravenosa, comumente utilizada para injeções intravenosas em humanos, e corte seus tubos de plástico. Após desinfecção rigorosa da pele abdominal do camundongo, faça uma incisão circular a dois milímetros de sua ponta, ao longo da linha média, de aproximadamente 15 milímetros. Abra a cavidade peritoneal incisando os músculos abdominais e o peritônio ao longo da linha alba.
Identifique o polo cecal e use cotonetes para puxar cuidadosamente o íleo terminal e o cólon ascendente para fora do abdômen. A 15 milímetros distalmente da válvula íleo-cecal, perfure a parede do cólon ascendente com um fio 7-0. Fixe o fio na parede do cólon com dois nós cirúrgicos.
Fure o cólon ascendente com uma cânula preparada. Um a dois milímetros proximal ao ponto de sutura sete oh. Insira cuidadosamente a cânula no cólon até que o sulco e o tubo plástico estejam nivelados com o cirro.
Coloque as extremidades livres do fio 7-0 ao redor da cânula e dê um nó duplo exatamente na sulco preparado do tubo plástico. Pegue a agulha do fio 7-0 e passe-a consecutivamente através da parede antimesentérica do cólon. Faça dois nós cirúrgicos para fixar adicionalmente o tubo plástico e a parede do cólon.
Corte as extremidades da sutura. Retire um pouco a parte metálica da cânula e corte o tubo plástico próximo à sutura 7.0 de fixação. Em seguida, mova cuidadosamente as fezes do ceco em direção ao stent do cólon utilizando cotonetes, até que uma pequena ponta de fezes apareça sobre o stent.
Coloque o intestino de volta na cavidade peritoneal e realize a ressuscitação com fluidos por administração intraperitoneal de 0,5 mililitros de solução salina. Feche o peritônio com um ponto contínuo. Feche a pele com pontos singulares para analgesia.
A administração subcutânea de uma substância analgésica potente, como a buprenorfina, deve ser realizada se necessário; coloque o animal de volta à sua gaiola, que deve conter alimento e água. Cinco horas após o casp, prepare e anestesie novamente o camundongo para realizar a intervenção cirúrgica no animal. Abra os pontos da parede abdominal.
Puxe cuidadosamente o cólon ascendente com o stent inserido, corte os pontos que fixam o stent e remova o stent. Feche o defeito no cólon com pontos simples invertidos. Devolva o intestino à cavidade abdominal e lave a região duas vezes com cinco mililitros de solução salina.
Fechamento do peritônio com sutura contínua. Fechamento da pele com suturas simples para analgesia. Administrar regularmente por via subcutânea uma substância analgésica potente.
Coloque o animal de volta na sua gaiola com alimento e água em abundância nos primeiros dois dias após a operação. Monitore os animais a cada seis horas nas primeiras horas seguintes ao procedimento CASP; os animais apresentam sinais clínicos de início de sepse. As taxas de sobrevivência após a cirurgia CASP dependem do diâmetro do stent inserido. O CASP com agulha 14 resulta em uma taxa de mortalidade de 100%; o CASP com agulha 16 resulta em 70% de mortalidade e o CASP com agulha 18 leva a 50% de mortalidade.
A CASP simulada está associada a uma sobrevida de 100%. O resultado da CASP depende do período de tempo. Após a CASP, quando o stent é removido, uma intervenção realizada três horas após a CSP resulta em uma taxa de sobrevida de 45%. Se o stent for removido cinco horas após a CSP, apenas 10% dos animais sobrevivem ao procedimento. A remoção do stent após nove horas resulta em uma mortalidade de 100%. A CASP simulada leva a uma sobrevida de 100%.
A inspeção macroscópica do abdome 24 horas após a CSP mostra sinais típicos de peritonite, edema, vasodilatação, aritmia, delimitação nítida da parede intestinal em áreas de necrose, paralisia intestinal, líquido livre e secreção séptica. A infecção sistêmica pode ser demonstrada por análise bacteriológica 12 horas após a CSP. Grandes quantidades de bactérias podem ser detectadas no lavado peritoneal, sangue, fígado, pulmão, baço e rins.
A sepse induzida por CSP manifesta-se na liberação local e também sistêmica de citocinas e quimiocinas pró e anti-inflamatórias. Doze horas após o CSP, quantidades significativas de TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10, MCP-1 e outras podem ser medidas por ELISA no sangue, mas também em sobrenadantes de suspensões de órgãos, como fígado, pulmão, baço e rim. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em 10 minutos, se for executada corretamente.
Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como gerar sepse abdominal com os modelos de SSP e SSP com intervenção. Isso é tudo. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.
Visão Geral
O modelo de peritonite por stent no colo ascendente (CASP) é um método padronizado para induzir sepse abdominal polimicrobiana em roedores. Este artigo detalha o procedimento cirúrgico envolvido na criação do modelo CASP, o qual facilita a investigação de questões relacionadas à sepse.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia
- Pesquisa em Sepse
Antecedentes
- O modelo CASP permite o estudo sistemático da sepse.
- Ele fornece insights sobre os mecanismos da sepse abdominal.
- Compreender a sepse pode levar a estratégias de tratamento melhores.
- Modelos em roedores são essenciais para pesquisas pré-clínicas.
Objetivo do Estudo
- Descrever o procedimento cirúrgico para o modelo CASP.
- Destacar as vantagens da técnica CASP em comparação com os métodos tradicionais.
- Fornecer uma estrutura para mensurar os desfechos da sepse.
Métodos Utilizados
- Preparação do cólon ascendente em camundongos.
- Inserção de um stent utilizando uma cânula.
- Monitoramento dos níveis de citocinas e contagem bacteriana após a cirurgia.
- Avaliação das taxas de sobrevivência com base no tamanho do stent e no momento da remoção.
Resultados Principais
- As taxas de sepse e mortalidade podem ser ajustadas conforme o tamanho do stent.
- As taxas de sobrevivência variam significativamente com base no momento da remoção do stent.
- O CASP induz respostas inflamatórias locais e sistêmicas.
- As contagens bacterianas em vários órgãos confirmam infecção sistêmica.
Conclusões
- O modelo CASP é eficaz para o estudo da sepse abdominal.
- Os resultados demonstram a utilidade do modelo na pesquisa de sepse.
- A técnica adequada é crucial para resultados bem-sucedidos.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O modelo de peritonite por stent no colo ascendente (CASP) fornece um sistema padronizado e reprodutível para o estudo da sepse abdominal polimicrobiana, permitindo a desintoxicação mecanicista de candidatos terapêuticos na pesquisa pré-clínica de sepse. Ao permitir a titulação da gravidade da doença por meio do diâmetro do stent e do momento da intervenção, o modelo apoia a validação de alvos e a confiança preditiva no desenvolvimento de fármacos imunomoduladores e anti-infecciosos. Isso posiciona o CASP como um sistema relevante para a doença na avaliação das interações entre hospedeiro e patógeno e das cascatas inflamatórias na descoberta translacional de biomarcadores.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmácia
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a investigação de hipóteses terapêuticas na sepse polimicrobiana ao modelar a translocação bacteriana contínua e a resposta do hospedeiro.
- Valor Operacional: Oferece um sistema altamente reprodutível para a validação funcional de alvos de imunomoduladores e agentes antimicrobianos.
- Valor Científico: Apoia a desmistificação biológica por meio de métricas quantificáveis de liberação de citocinas e infecção orgânica.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Valor Científico: Gera sistemas biológicos validados com leituras mensuráveis de citocinas e bactérias para padronização de ensaios.
- Valor Operacional: Fornece saídas quantitativas (níveis de citocinas, contagens bacterianas) que permitem triagem confiável de compostos e avaliação de resposta à dose.
- Valor Científico: Facilita a prontidão do ensaio por meio da indução consistente de inflamação sistêmica e bacteremia.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Valor Científico: Reflete o curso clínico da sepse abdominal, apoiando o alinhamento translacional de biomarcadores para IL-6, IL-10, MCP-1 e TNF-α.
- Valor Operacional: Permite continuidade desde a descoberta até a validação pré-clínica por meio da modelagem do momento da remoção do stent (variante CASPI), simulando intervenção clínica.
- Valor Científico: Apoia decisões de avanço ajustadas ao risco, correlacionando o tamanho do stent e o momento da intervenção com desfechos de sobrevida.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O modelo CASP insere-se no continuum de descoberta, desde a validação do alvo até os testes de eficácia pré-clínica, especialmente para terapias moduladoras da sepse, nas quais a desvinculação mecanicista e a confiança preditiva são fundamentais.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses sobre interações entre hospedeiro e patógeno e modulação de vias inflamatórias na sepse polimicrobiana.
- Triagem: Oferece sistemas prontos para ensaio com quantificação padronizada de citocinas e bactérias para avaliação de compostos.
- Análises: Permite a medição de variáveis dependentes, como concentrações plasmáticas de citocinas (TNF-α, IL-6, IL-10, MCP-1) e carga bacteriana no lavado peritoneal e em órgãos.
- Pesquisa Translacional: Conecta-se à continuidade pré-clínica por meio da modelagem da variante CASPI, simulando a remoção clínica do foco séptico e seu impacto na sobrevida.
- Reutilização Empresarial: Representa uma plataforma reutilizável para padronização de modelos de sepse em programas de descoberta voltados para imunologia, infectologia e cirurgia.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Confiança preditiva na modulação do alvo, redução da ambiguidade mecanicista na fisiopatologia da sepse.
- Valor Operacional: Alta reprodutibilidade, titulação da gravidade mediante o tamanho do stent e padronização do procedimento.
- Valor Estratégico: Melhoria nas decisões de avanço ou interrupção de projetos, eficiência no uso de capital em programas de sepse e redução do risco de falha biológica em fases tardias.
- Impacto no Portfólio: Priorização ajustada ao risco de candidatos com base em dados de sobrevivência, modulação de citocinas e eliminação bacteriana.
Considerações de Implementação
- Exige experiência microcirúrgica na manipulação do cólon de roedores e fixação de stents.
- Requer instrumentação cirúrgica estéril, adaptação de cânulas e materiais de sutura para colocação de stent no cólon.
- Exige padronização entre equipes na seleção do calibre do stent e nos protocolos de cronometragem para comparação entre estudos.
- Envolve considerações de adaptação entre modelos de camundongos e ratos, com atenção aos cuidados perioperatórios e à analgesia.
- Limitado pela dependência da habilidade do operador até que a proficiência seja alcançada, o que afeta a produtividade e a reprodutibilidade entre laboratórios.
