Experimentação fisiológicas com o intestino posterior Crayfish: Um Exercício Laboratório de Student

O objetivo geral deste relatório é ser uma ferramenta de ensino para alunos avançados do ensino médio e de graduação em cursos de fisiologia que participam da experimentação fisiológica. Os alunos aprendem a expor e registrar contrações no intestino traseiro do lagostim. Um passo adicional é extirpar o intestino posterior do animal, o que permite a aplicação direta de compostos.

Em seguida, a força e o ritmo das contrações do músculo liso do intestino grosso são monitorados durante a aplicação de vários agentes farmacológicos para examinar os mecanismos que alteram a força de contração. São obtidos resultados que mostram a ação de moduladores nos internos neurais ou diretamente no músculo com base em ensaios farmacológicos e subtipagem de receptores. Olá, sou o Dr.J Mercier, do Departamento de Ciências Biológicas da Universidade de Brock.

Tenho usado o intestino traseiro do lagostim como uma preparação para a realização de pesquisas sobre neurotransmissores que controlam os músculos viscerais. Também tenho usado essa preparação como uma ferramenta de ensino e, como parte de uma colaboração com o laboratório do Dr. Robin Cooper na Universidade de Kentucky, estamos aperfeiçoando uma série de experimentos realizados por alunos para fins de ensino. Este método pode fornecer informações sobre a função do intestino de lagostim.

Também pode ser aplicado em estudos de doenças, como doenças envolvendo ritmos peristálticos. Também pode ser usado para descrever os mecanismos subjacentes à modulação da inervação muscular e neural. Os alunos aprenderão a interpretar dados fisiológicos e farmacológicos através do uso de agentes farmacológicos, neurotransmissores e neuro-hormônios, e adquirirão uma compreensão geral da função do receptor.

No que diz respeito aos agonistas e antagonistas, os alunos construirão curvas de resposta à dose e apresentarão os dados em forma gráfica para análise estatística Para anestesiar o animal, coloque um lagostim medindo de seis a 10 centímetros de comprimento corporal no gelo por cinco a 10 minutos. Segure o lagostim anestesiado por trás das garras com uma mão. Corte rapidamente da órbita ocular até o meio da cabeça em ambos os lados e, em seguida, decapite o lagostim.

O sangue da preparação ficará pegajoso quando tentar, então lave as ferramentas quando terminar. Em seguida, corte as pernas e as garras. Em seguida, as barbatanas caudais esquerda e direita, deixando a barbatana caudal média cortada ao longo do lado dorsal do abdômen até que o último segmento seja alcançado.

Em seguida, corte ao longo do último segmento e desça do outro lado. Retire a concha dorsal. Coloque o lagostim dissecado na placa de Petri forrada com sigar.

Pobre solução salina para lagostins. Para cobrir a preparação, use pinos de dissecação para prender a preparação à placa de Petri. O intestino posterior é geralmente cercado por uma massa de vasos sanguíneos e tecido conjuntivo.

Remova-os com uma pinça. Tomando cuidado para não danificar o intestino. O intestino posterior agora é visível ao longo do abdômen.

Deixe a preparação de lagostim dissecada descansar na solução salina por cerca de 10 minutos para que possa se recuperar do choque da dissecção e da exposição à solução salina. Observe as lentas contrações peristálticas do intestino posterior. Para começar, a taxa de contrações agora pode ser calculada.

Conte o número de contrações que ocorrem em 30 segundos e registre-o em um registro. Registre também o tipo de contrações que ocorrem e se são peristálticas ou espásticas. Observe a direção de quaisquer ondas peristálticas.

Conte a taxa de contrações perto do ânus e no meio do abdômen, veja se há diferenças de taxa entre essas duas regiões. Tenha uma variedade de soluções de teste prontas e na mesma temperatura que a solução salina de banho. A primeira solução testada aqui será uma serotonina micromolar feita em solução salina de lagostim.

Usando uma pipeta, remova a solução salina da cavidade do abdômen exposto do lagostim e aplique a solução de serotonina micromolar diretamente no intestino posterior. Imediatamente após adicionar a nova solução, espere 30 segundos e conte 30 segundos de contrações na região próxima ao ânus e, em seguida, conte os próximos 30 segundos de contrações no meio do abdômen. Registre esses números em um gráfico e também anote o tipo de contrações que ocorrem. Próximo.

Despeje a solução de teste do prato de registro e lave o intestino posterior várias vezes com solução salina normal de lagostim. Em seguida, enxágue a preparação a cada 30 segundos por cinco minutos. Neste ponto, você pode adicionar a próxima solução de teste, que nesta demonstração é uma Topamina Micromolar.

Registar as suas observações como antes e repetir este processo para as restantes compostas de ensaio. Ao usar várias concentrações da mesma substância, certifique-se de começar com a concentração mais baixa e trabalhar para concentrações mais altas. A configuração para medir a força das contrações GI inclui um laptop com software de gráfico de laboratório sete, o pod de ponte, o laboratório de potência, 26 T e o transdutor de força.

Antes de medir a força das contrações musculares GI, você precisa isolar o trato gastrointestinal. Para conseguir isso, corte os músculos do último segmento abdominal, coloque dois ou mais pinos na cutícula ventral macia de cada lado do ânus e, em seguida, corte o resto do abdômen, deixando o intestino posterior e o ânus presos a um pequeno pedaço de cutícula. O intestino deve ser cortado perto da junção do tórax e do abdômen.

Agora mova o trato gastrointestinal para um prato raso com fundo revestido de sard. Há um vaso sanguíneo que corre ao longo do aspecto dorsal do trato gastrointestinal. Puxe-o cuidadosamente para longe do trato gastrointestinal.

Despeje a solução salina fresca de lagostim na preparação. Mova o transdutor de força para a preparação. Observe atentamente o pino que está colado na parte inferior do transdutor de força.

A extremidade que se prende ao intestino tem uma pequena curvatura. Prenda a pequena dobra do pino na extremidade cortada do intestino posterior. Depois de enganchar o intestino posterior, mova o prato ligeiramente até que o intestino posterior esteja esticado.

Tenha cuidado com esta etapa, pois o intestino deve estar esticado, mas não muito apertado. Estar muito apertado pode danificar o músculo. Quando o prato estiver na posição ideal, use cera ou argila para mantê-lo firme.

Em seguida, inicie o software. Para começar a gravar, abra o software de gráfico de laboratório. Feche o prontuário do laboratório, centro de boas-vindas.

Vá para a configuração no canto superior esquerdo. Clique nas configurações do canal no canto inferior esquerdo. Altere as configurações do canal para ter apenas um canal.

Clique em OK no lado direito da tela. Vá para o canal um pod de ponte aberta. Defina o intervalo para a configuração mais sensível, 200 microvolts neste caso na parte superior do gráfico no canto direito.

Defina ciclos por segundo para 2K. Agora você está pronto para gravar. Clique em iniciar para garantir que a configuração esteja funcionando corretamente.

Toque levemente na ponta do transdutor com uma pipeta. Você deve ver uma mudança na força registrada pelo software. Clique em parar no software, clique em iniciar e deixe o programa ser executado.

Por cerca de 20 segundos, clique em parar e adicione um comentário rotulado como solução salina. Calcule a taxa de contrações apenas medindo o tempo desde o início de uma deflexão até o início da próxima, ou contando a deflexão total em um ou dois minutos. Calcule a taxa como contrações por minuto ou como contrações por segundo, dependendo da rapidez com que estão ocorrendo.

Para medir a força das contrações, use uma medida relativa para comparar as contrações sob diferentes condições no arquivo salvo. Mova o marcador M para a linha de base, depois mova o cursor para o pico da deflexão e observe o valor listado no canto superior direito da tela. Este é um valor delta que é a diferença de M para o pico.

Observe que o cursor precisa ser mantido estacionário no pico para medir a mudança. Em seguida, mova o marcador M e o cursor para a próxima forma de onda de interesse e repita a medida para examinar o efeito dos moduladores. Nesta preparação, mude lentamente a solução salina para uma solução de teste.

Neste caso, um serotonina micromolar, e continue registrando a taxa e a força das contrações como o último teste. Para este teste de preparação se os inibidores da junção comunicante alteram a taxa ou a força das contrações, os inibidores da junção comunicante incluem um etanol hep ou solução salina que foi borbulhado com dióxido de carbono. Esses compostos são usados por último, pois podem danificar as fibras musculares após exposição prolongada para comparar o efeito dos vários compostos, representar graficamente os dados em um gráfico.

Outro uso interessante dessa preparação é registrar a força gerada pelos músculos circulares. No entanto, se você aplicou inibidores de junções comunicantes à sua preparação, os inibidores podem ter danificado os músculos circulares, caso em que você deve usar uma preparação fresca do intestino posterior para testar os músculos circulares. Para expor os músculos circulares, corte o tubo do intestino em um plano longitudinal com uma tesoura fina.

Use alfinetes finos para prender um lado com segurança ao prato. Prenda o pino em forma de gancho no transdutor do outro lado da tira. Exponha a preparação aos mesmos compostos que foram testados nos músculos longitudinais, a relação entre os compostos testados e o número e tipo de contrações são mostrados aqui.

Você pode representar graficamente o número de contrações versus o tempo para as soluções salinas, serotonina e glutamato. Você pode representar graficamente o número de contrações versus a força das contrações em milivolts para as soluções salinas de glutamato de serotonina. Esses enxertos podem ser feitos para os músculos longitudinais e circulares para testar se os músculos longitudinais e circulares nas diferentes regiões do intestino exibem respostas diferentes aos vários moduladores.

Os experimentos acima podem ser repetidos em diferentes regiões do ânus e ao longo do abdômen. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de ter cuidado para não danificar o trato gastrointestinal com a pinça e não puxar com muita força com o transdutor de força Seguindo este procedimento. Outros métodos, como eletrofisiológicos, gravações do músculo podem ser realizados para abordar outras questões, como funções e modulações dos canais iônicos, e que podem servir como modelo e outros tecidos em outros modelos animais.