Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:30 min. • March 4th, 2025
Obtenha tecido da medula espinhal quimicamente fixado de camundongos induzidos com desmielinização autoimune em pontos de tempo definidos durante a progressão da doença.
A doença desencadeia células imunes autorreativas para atacar proteínas de mielina, degradando a bainha de mielina ao redor dos axônios neuronais.
As células precursoras de oligodendrócitos são recrutadas para o local afetado, amadurecem em oligodendrócitos e reformam a bainha de mielina.
Enxágue o tecido com um tampão para remover o excesso de fixador e, em seguida, trate-o com ósmio, que se liga aos lipídios da mielina e aumenta o contraste para a imagem.
Aplique manchas de metais pesados que se ligam a macromoléculas e aumentam o contraste.
Desidrate o tecido usando concentrações crescentes de álcool. Pegue o tecido embebido em resina e obtenha cortes ultrafinos.
Usando microscopia eletrônica, meça a espessura da bainha de mielina para classificar os axônios como desmielinizantes com uma bainha inchada e mais espessa, desmielinizados sem bainha ou remielinizados com uma bainha fina.
Identifique o dano axonal caracterizado por espaçamento reduzido entre neurofilamentos e mitocôndrias inchadas ou degeneração completa.
Analise a progressão do dano axonal e repare ao longo do tempo para avaliar a progressão da doença.