Protocolo para produção de uma Cruz genética do parasita da malária de roedores

O objetivo geral deste procedimento é produzir um cruzamento genético do parasita da malária de roedores plasmodium yoi para gerar progênie recombinante. Isso é conseguido injetando primeiro um grupo de camundongos com um inóculo misto contendo os dois clones parentais dos parasitas a serem cruzados. Os camundongos infectados são então usados para alimentar os mosquitos dentro, que o gat de cada cepa parental se fundirá em uma divisão miótica de zigoto diplóide neste estágio pode levar à recombinação genética, produzindo assim progênie recombinante.

Os esporozoítos resultantes são então colhidos das glândulas sali dos mosquitos e reinjetados em camundongos receptores virgens, a fim de obter parasitas em estágio sanguíneo, entre os quais estão clones recombinantes individuais que podem ser isolados por diluição limitada. Em um experimento bem-sucedido, cinco a 10% das linhagens clonadas serão recombinantes, o que pode ser caracterizado por genotipagem para marcadores genéticos apropriados. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo de pesquisa da malária, como quais são os determinantes genéticos das formigas resistentes a medicamentos e a transmissibilidade na malária?