Transplante de progenitores neuronais derivados de células-tronco em fatias corticais humanas

Comece com uma cultura aderente de células-tronco progenitoras neuronais derivadas de células-tronco preparadas para diferenciação em neurônios corticais.

Remova o meio e, em seguida, adicione uma enzima para romper a matriz extracelular e separar as células.

Use um inibidor para neutralizar a enzima e, em seguida, adicione um meio novo.

Transfira a suspensão para um tubo, centrifugue e descarte o sobrenadante para isolar as células.

Ressuspenda as células em uma matriz de membrana basal para facilitar o transplante para o tecido cerebral e, em seguida, carregue-as em um tubo capilar frio.

Pegue uma fatia cortical humana em um conjunto de transwell contendo um meio.

Remova parte do meio e injete gotículas da suspensão celular no tecido.

Incube para permitir que a matriz se solidifique.

Adicione um meio para imergir o tecido e, em seguida, incube para permitir que as células progenitoras se diferenciem em neurônios, estendam seus neuritos e formem sinapses com os neurônios corticais hospedeiros.

A fatia cortical está agora pronta para análise.

Retirar o meio do balão de cultura de células. No sétimo dia de diferenciação, separe as células GFP-lt-NES com primer cortical adicionando 500 microli