Injeção estereotáxica de vírus para modificação genética estável em um modelo de camundongo

Comece com um camundongo anestesiado com o crânio exposto em uma estrutura estereotáxica.

Abaixe o porta-seringas até que a ponta da agulha se alinhe com o bregma, um ponto de referência do crânio.

Usando as coordenadas estereotáxicas pré-determinadas, localize a zona ventricular-subventricular ou

V-SVZ, um nicho neurogênico contendo principalmente células-tronco neurais ou NSCs, e marque essa região.

Remova a seringa e faça um pequeno orifício com cuidado, evitando danos cerebrais.

Encha uma seringa estéril com vírus portadores do transgene e posicione a agulha sobre a superfície do cérebro.

Reposicione a seringa e abaixe-a até que a ponta toque a camada superficial mais interna do cérebro.

Penetre no cérebro para alcançar a V-SVZ, injete lentamente o vírus, segure brevemente e retire a seringa.

No V-SVZ, o vírus entra nas NSCs por meio da fusão por membrana. Seu RNA reverso transcreve em DNA.

Esse DNA então se integra ao genoma do NSC, permitindo a modificação genética estável dos NSCs.

Após a anestesia, um camundongo de seis a oito semanas raspa a área entre as orelhas. Em seguida, desinfete a pele usando um iodóforo, como iodo, povidona ou etanol a 70%. Em seguida, coloque o animal em de