Isolamento e Enriquecimento de Vesículas Extracelulares Derivadas da Membrana Externa de Bactérias

Comece inoculando uma colônia de bactérias geneticamente modificadas em um meio líquido.

Essas bactérias expressam uma proteína de fusão fluorescente na membrana externa, uma camada protetora externa.

Incubar para que as bactérias liberem vesículas extracelulares (EVs), nanoestruturas ligadas à membrana envolvidas na comunicação intercelular, que incorporam a proteína fluorescente.

Transfira a cultura para uma garrafa e centrifugue em baixa velocidade para pellet as células.

Transfira o sobrenadante contendo EVs, proteínas celulares e detritos celulares. Centrifugue em alta velocidade e remova o sobrenadante contendo detritos.

Filtre o sobrenadante através de uma membrana para eliminar quaisquer bactérias e detritos restantes.

Inocular uma amostra em ágar e incubá-la. A falta de formação de colônias bacterianas confirma a ausência de bactérias.

Transfira a solução para um dispositivo de ultrafiltração com uma membrana semipermeável e centrifugue para capturar os EVs enquanto elimina proteínas menores.

Colete os EVs concentrados em um tubo para análise a jusante.

Comece inoculando colônias únicas de Escherichia coli em 250 a 1000 mililitros de Luria-Bertani, ou caldo LB, usando uma alça esté