Preparação de um inóculo bacteriano unicelular

Faça uma cultura metabolicamente ativa de Mycobacterium marinum. Isso garante alta viabilidade bacteriana e ótimo estado fisiológico.

Centrifugue a cultura para pellet as bactérias.

Rejeitar o excesso de sobrenadante e ressuspender o sedimento em meios frescos contendo um agente dispersante.

Transferir a suspensão para tubos de microcentrífuga e sonicar em condições controladas.

A sonicação interrompe os agregados bacterianos e dispersa as células, resultando em uma suspensão unicelular viável.

Recolher a suspensão sonicada numa seringa e passá-la através de um filtro de membrana para remover os grumos remanescentes, garantindo uma população unicelular uniforme.

Com um espectrofotómetro, medir a densidade óptica da suspensão bacteriana.

Dilua a suspensão com meios novos contendo crioprotetor para atingir a concentração bacteriana desejada, preservando a viabilidade celular.

Alicote a suspensão final de célula única e armazene-a em temperaturas ultrabaixas. O crioprotetor ajuda a manter a viabilidade bacteriana durante o armazenamento a longo prazo.

Após a inoculação de acordo com o manuscrito, centrifugue a cultura a 3000 vezes G por 10 minutos para coletar o Mycobacterium marinum como um p