Avaliação da transcitose de E. coli através de monocamadas epiteliais intestinais

Comece com uma cultura de E. coli isolada de recém-nascidos com infecções da corrente sanguínea.

Centrifugue para pellet a bactéria, descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet em um meio livre de antibióticos.

Pegue uma placa com um inserto transwell contendo uma monocamada de células epiteliais intestinais.

Meça a resistência elétrica em toda a camada celular com uma sonda para confirmar a integridade da monocamada.

Adicione a suspensão bacteriana na inserção e incube.

As bactérias aderem às células epiteliais, são internalizadas dentro das vesículas e são transportadas através das células para o poço inferior por meio de um processo chamado transcitose.

Meça novamente a resistência elétrica; Um valor estável confirma uma monocamada intacta durante a transcitose.

Transfira o inserto para um novo poço e colete o meio do poço inferior anterior.

Coloque o meio coletado em uma placa de ágar e incube para desenvolver as colônias bacterianas.

Conte as colônias para determinar a extensão da transcitose de E. coli através da barreira epitelial intestinal.

A cada 30 minutos após a inoculação, encha novos poços com 500 microlitros de TCM sem antibióticos e transfira as inserções para esses novos