JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:14 min • September 26th, 2025
Comece com uma cepa bacteriana bioluminescente marinha carregando o operon de luminescência, que codifica a luciferase e as enzimas necessárias para a síntese do substrato.
Listre a tensão em uma placa de ágar rica em nutrientes suplementada com água do mar artificial para imitar a salinidade nativa e apoiar o crescimento.
Incubar para obter colônias discretas e, em seguida, isolar e inocular uma única colônia em meio líquido contendo água do mar artificial.
Incubar com agitação para promover o crescimento durante a noite na fase exponencial.
Transfira um volume definido da cultura durante a noite para um meio fresco e incube-o para aumentar a densidade bacteriana.
À medida que a população se expande, as bactérias liberam autoindutores, sinalizando moléculas que se acumulam e se difundem nas células, onde se ligam a receptores intracelulares, ativando o operon de luminescência.
Essa ativação induz a expressão da luciferase e a biossíntese do substrato.
A luciferase catalisa a oxidação do substrato, emitindo luz azul-esverdeada.
Monitore a cultura para bioluminescência como um indicador de ativação do operon de luminescência e emissão de luz em bactérias marinhas.
Depois de preparar o meio de acordo com o protocolo de texto, listre as cepas bioluminescentes bacterianas em placas de ágar médio de água do mar artificial e incuba-as a 24 a 30 graus Celsius durante a noite.
Prepare uma cultura durante a noite inoculando 100 mililitros de meio artificial de água do mar com uma única colônia da placa. Em seguida, incube a cultura a 24 a 30 graus Celsius e 120 RPM durante a noite. No dia seguinte, inocule 800 mililitros de meio artificial de água do mar com 8 mililitros de cultura durante a noite.
Incube as células bacterianas a 24 a 30 graus Celsius e 120 RPM e observe as células até que comecem a brilhar.
Este artigo demonstra o cultivo e o monitoramento in situ de bactérias marinhas bioluminescentes para estudar a ativação do operon da bioluminescência mediada por quorum sensing. O protocolo permite a observação em tempo real da densidade celular e da emissão de luz, fornecendo insights sobre a comunicação microbiana e a regulação gênica.
O monitoramento em tempo real da ativação do operon de luminiscência em bactérias marinhas fornece uma leitura direta e quantitativa da expressão gênica mediada pelo quorum sensing. Essa capacidade permite a validação precoce de alvos e a redução de riscos mecanicistas em estudos de comunicação microbiana e regulação gênica. A abordagem oferece confiança preditiva na investigação de vias metabólicas e na genômica funcional dentro de pipelines de descoberta.
Este método integra-se ao continuum de descoberta, desde a verificação inicial de hipóteses até o desenvolvimento de ensaios e pesquisas translacionais em sistemas microbianos.
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Última atualização: 22 agosto 2026