Transferência de plasmídeo F e seleção dupla de antibióticos em E. coli

Comece com células de E. coli do doador carregando um plasmídeo F no qual um gene de transferência é substituído por um gene de resistência a antibióticos.

Essas células também contêm um plasmídeo de resgate que codifica o gene de transferência ausente.

Pegue volumes iguais de células receptoras de E. coli com um gene de resistência a antibióticos diferente em seu DNA.

Misture as duas culturas em meios nutritivos sem antibióticos e incube sem agitar.

O plasmídeo de resgate da bactéria doadora expressa o gene de transferência, permitindo que a célula doadora construa um F-pilus.

O pilus forma uma ponte entre duas células, permitindo a transferência unidirecional do plasmídeo do doador para o receptor, formando transconjugantes.

Vortex a mistura para interromper os pares de acasalamento e coloque-a no gelo para evitar mais acasalamento.

Localize a cultura em placas de ágar contendo antibióticos selecionáveis transconjugantes e incuba.

Os transconjugantes, portadores de ambos os genes de resistência a antibióticos, sobrevivem e formam colônias na presença de ambos os antibióticos, confirmando a transferência bem-sucedida do plasmídeo F.

Em duplicata, alíquota de 100 microlitros de células doad