Imagem bioluminescente da progressão do tumor de mama em um modelo de camundongo fêmea

Comece com um camundongo fêmea injetado com células tumorais de mama que expressam luciferase.

As células tumorais proliferam no local da injeção e se desenvolvem em um tumor primário.

Coloque o mouse em uma câmara de imagem com um fluxo anestésico para anestesiar o mouse.

Em seguida, injete luciferina, um substrato para luciferase, no camundongo anestesiado.

A luciferina circula e entra nas células tumorais, reagindo com a luciferase para emitir bioluminescência.

Usando o sistema de imagem, capture o sinal de bioluminescência do mouse.

Com o tempo, o tumor progride no local primário e metástase para os pulmões.

Adquira a imagem do mouse em intervalos regulares e defina as regiões de interesse.

Com base nas intensidades de bioluminescência, construa a cinética de crescimento tumoral para ambos os locais.

Com o tempo, um aumento constante no sinal no local do tumor primário indica proliferação contínua do tumor.

No entanto, um aumento acentuado na bioluminescência pulmonar em momentos posteriores sugere metástase de células tumorais.

Para começar, mantenha a linha celular 4T1 no Meio de Águia Modificado de Dulbecco suplementado ou DMEM. Incube as células a 37 graus Celsius em uma atmosfera umidificada contendo 5% de dióxido de carbono.

Transfectar a linhagem celular 4T1 com o gene Luc2 para expressar luciferase, uma enzima bioluminescente que é produzida constitutivamente. Incube as células para mantê-las prontas para a injeção no camundongo.

Cinco minutos após anestesiar e preparar um camundongo Balb-C, injete 2 vezes 10 na potência cinco células 4T1 que expressam luciferase por via subcutânea no dorso esquerdo usando uma seringa de insulina de 1 mililitro. Alojar o animal durante 4 semanas após a injeção.

Para a imagem, coloque o camundongo anestesiado em uma posição dorsal reclinada dentro da área designada do equipamento de imagem bioluminescente. Injete no camundongo por via intraperitoneal 100 microlitros de solução de D-luciferina a uma concentração de 15 miligramas por mililitro.

Para ajustar os parâmetros de imagem, defina o filtro de emissão aberto sem excitação, binning para 8, F-Stop para 2 e tipo de campo de visão para D. Capture 20 imagens bioluminescentes em 20 minutos para cada animal em cada ponto final de imagem, garantindo que as imagens representem uma integração de sinal de 60 segundos.

Usando o software do equipamento, defina regiões específicas de interesse para distinguir entre o tumor primário e os sinais de metástase pulmonar. Identifique sinais bioluminescentes no local da injeção e na região torácica onde ocorre a metástase. Calcule a progressão do tumor com base nas intensidades de sinal bioluminescentes.

Usando imagens coletadas semanalmente, construa um perfil de cinética de crescimento para representar as mudanças de intensidade de sinal ao longo do tempo no tumor primário e nos locais metastáticos. Compare as tendências de intensidade do sinal para analisar a progressão e metástase do tumor.